| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-26页 |
| 1 布鲁菌研究概况 | 第16-18页 |
| 1.1 布鲁菌病 | 第16页 |
| 1.2 布鲁菌病原学特点 | 第16-18页 |
| 1.3 布鲁菌的致病机制 | 第18页 |
| 2 自诱导物信号分子AI-2的检测 | 第18-22页 |
| 2.1 群体密度感应系统 | 第18-19页 |
| 2.2 信号分子AI-2的合成与作用 | 第19-21页 |
| 2.3 信号分子AI-2的检测 | 第21-22页 |
| 3 甲硫氨酸代谢通路 | 第22-26页 |
| 3.1 甲硫氨酸与甲硫氨酸代谢通路 | 第22-24页 |
| 3.2 SahH与sahH型甲硫氨酸代谢通路 | 第24-26页 |
| 第二章 布鲁菌中信号分子AI-2的检测及检测方法的优化 | 第26-39页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株 | 第26页 |
| 2.1.2 主要仪器与试剂 | 第26页 |
| 2.1.3 培养基与试剂配制 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-29页 |
| 2.2.1 哈维弧菌BB170生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2.2.2 培养上清的制备 | 第27页 |
| 2.2.3 确定样品上清采集的最佳OD600值及最佳培养时间 | 第27-28页 |
| 2.2.4 影响BB152上清(阳性对照)制备的因素分析 | 第28页 |
| 2.2.5 哈维弧菌BB170的培养条件对AI-2信号分子检测灵敏度的影响 | 第28页 |
| 2.2.6 阴性对照值变化的原因探究 | 第28-29页 |
| 2.2.7 大肠杆菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌的AI-2信号分子检测验证 | 第29页 |
| 2.2.8 布鲁氏菌及鸭疫里默氏杆菌上清中AI-2信号分子的检测 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-36页 |
| 2.3.1 哈维弧菌BB170生长曲线测定结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 确定样品上清采集的最佳OD600值及最佳培养时间 | 第30-31页 |
| 2.3.3 不同培养条件对阳性对照BB152的AI-2活性影响 | 第31-32页 |
| 2.3.4 不同OD600值对BB152阳性对照的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.5 哈维弧菌BB170的培养条件对AI-2信号分子检测灵敏度的影响 | 第33-34页 |
| 2.3.6 阴性对照值变化的原因探究 | 第34-35页 |
| 2.3.7 对布鲁菌等不同细菌的AI-2信号分子检测 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 sahH基因的克隆表达,蛋白纯化及体外活性验证 | 第39-53页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 培养基 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要仪器与设备 | 第40页 |
| 3.2 方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第40-41页 |
| 3.2.2 pET28a-sahH(A19)原核表达质粒的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.3 重组蛋白SahH的诱导表达及SDS-PAGE电泳分析 | 第42-43页 |
| 3.2.4 重组蛋白SahH的的体外催化活性验证 | 第43-44页 |
| 3.2.5 重组蛋白LuxS,Pfs的诱导表达及纯化 | 第44页 |
| 3.2.6 SahH重组蛋白的体外活性验证 | 第44-45页 |
| 3.3 结果 | 第45-51页 |
| 3.3.1 原核表达质粒pET28a-sahH(A19)的构建及重组菌的测序鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3.2 重组菌BL21(pET28a-luxS),BL21(pET28a-pfs)的诱导表达及可溶性分析 | 第46-47页 |
| 3.3.3 重组菌BL21(pET28a-sahH)的诱导表达及可溶性分析 | 第47-49页 |
| 3.3.4 HCY标准曲线的建立 | 第49页 |
| 3.3.5 LuxS/Pfs及SahH的体外催化活性结果 | 第49-50页 |
| 3.3.6 SahH浓度和底物浓度对SahH催化活性的影响 | 第50页 |
| 3.3.7 外源性NAD+对酶蛋白SahH的体外催化活性影响 | 第50-51页 |
| 3.3.8 温度对重组蛋白SahH体外催化活性的影响 | 第51页 |
| 3.4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 蛋白修饰及催化活性位点对SahH催化活性的影响 | 第53-73页 |
| 4.1 材料 | 第53页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.2 方法 | 第53-61页 |
| 4.2.1 SahH重组蛋白的质谱分析 | 第53-54页 |
| 4.2.2 双表达重组质粒pETDuet-gNAD-sahH的构建 | 第54-57页 |
| 4.2.3 双表达载体SahH的诱导表达及可溶性分析 | 第57页 |
| 4.2.4 双表达载体SahH的体外催化活性分析 | 第57-58页 |
| 4.2.5 原核表达载体pET28a-sahH-M337,M338,M337-338,M444突变株的构建 | 第58-60页 |
| 4.2.6 SahH突变株的诱导表达及可溶性分析 | 第60-61页 |
| 4.2.7 重组蛋白SahH的多克隆抗体制备 | 第61页 |
| 4.3 结果 | 第61-72页 |
| 4.3.1 SahH重组蛋白的质谱分析 | 第61-62页 |
| 4.3.2 双表达重组质粒pETDuet-gNAD-sahH的构建 | 第62-63页 |
| 4.3.3 重组菌BL21(pETDuet-gNAD-sahH),BL21(pETDuet-sahH)的可溶性分析及蛋白纯化 | 第63-66页 |
| 4.3.4 双表达载体SahH的体外催化活性分析 | 第66页 |
| 4.3.5 原核表达载体pET28a-sahH-M337,M338,M337-338,M444突变株的构建 | 第66-69页 |
| 4.3.6 突变株重组菌SahH蛋白的可溶性分析及蛋白纯化 | 第69-71页 |
| 4.3.7 突变重组蛋白SahH的体外催化活性分析 | 第71-72页 |
| 4.4 讨论 | 第72-73页 |
| 第五章 全文总结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
