| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 研究的目的及意义 | 第14页 |
| 1.2 HBK-SPF鸭概述 | 第14-15页 |
| 1.3 TAP蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3.1 TAP蛋白的结构 | 第15页 |
| 1.3.2 TAP蛋白的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.4 鸭瘟 | 第16-18页 |
| 1.4.1 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.4.2 病原学 | 第17页 |
| 1.4.3 致病性 | 第17-18页 |
| 1.5 TAP与疱疹病毒病 | 第18-19页 |
| 第二章 TAP单倍型SPF鸭的遗传学稳定性监测 | 第19-28页 |
| 2.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 F0代Tap1基因型SPF鸭编码区氨基酸序列的分析 | 第19页 |
| 2.2.2 F3代B系列鸭Tap2基因组的PCR扩增 | 第19-20页 |
| 2.2.3 F3代B系列鸭序列分析 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-26页 |
| 2.3.1 F0代B系列鸭Tap2编码区氨基酸序列分析结果 | 第20-21页 |
| 2.3.2 F3代B系列鸭Tap2基因扩增结果 | 第21页 |
| 2.3.3 F3代B系列鸭Tap2基因序列分析结果 | 第21-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-28页 |
| 第三章 B2TAP单倍型SPF鸭TAP2肽结合区(PBD)单克隆抗体的制备 | 第28-41页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 实验动物和细胞 | 第28页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-34页 |
| 3.2.1 免疫原的制备 | 第28-29页 |
| 3.2.2 动物免疫 | 第29-30页 |
| 3.2.3 优化包被蛋白浓度和血清稀释度 | 第30页 |
| 3.2.4 细胞融合 | 第30-31页 |
| 3.2.5 间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞 | 第31页 |
| 3.2.6 杂交瘤细胞的亚克隆、冻存和复苏 | 第31页 |
| 3.2.7 腹水的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.8 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第32页 |
| 3.2.9 腹水的Western Blot检测 | 第32页 |
| 3.2.10 质谱分析 | 第32页 |
| 3.2.11 间接免疫荧光试验 | 第32页 |
| 3.2.12 不同动物种属特异性的免疫组化检测 | 第32-33页 |
| 3.2.13 免疫电镜试验 | 第33页 |
| 3.2.14 单抗表位的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.15 抗原表位序列分析 | 第34页 |
| 3.3 结果 | 第34-39页 |
| 3.3.1 TAP2PBD原核表达蛋白纯化条件的优化 | 第34页 |
| 3.3.2 包被蛋白浓度和血清稀释度的确定 | 第34-35页 |
| 3.3.3 单克隆抗体的亚型鉴定 | 第35页 |
| 3.3.4 腹水的Western Blot检测 | 第35页 |
| 3.3.5 质谱鉴定 | 第35-36页 |
| 3.3.6 间接免疫荧光检测结果 | 第36页 |
| 3.3.7 免疫组化结果 | 第36-37页 |
| 3.3.8 免疫电镜结果 | 第37-38页 |
| 3.3.9 1A6单抗表位的初步鉴定 | 第38页 |
| 3.3.10 抗原表位序列分析 | 第38-39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 TAP单倍型SPF鸭体内感染DEVCSC标准强毒试验 | 第41-52页 |
| 4.1 材料 | 第41页 |
| 4.1.1 实验动物和毒株 | 第41页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第41页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 接种 | 第41-42页 |
| 4.2.2 临床症状 | 第42页 |
| 4.2.3 病变观察 | 第42页 |
| 4.2.4 盲肠中DEV拷贝数的定量PCR检测 | 第42页 |
| 4.2.5 十二指肠中MHCI、IFN-α、IFN-β和IFN-γ转录水平的定量PCR检测.. | 第42-44页 |
| 4.2.6 胆汁和哈德氏腺中IgA转录水平的定量PCR检测 | 第44页 |
| 4.2.7 十二指肠中TAP蛋白的免疫组化检测 | 第44页 |
| 4.3 结果 | 第44-50页 |
| 4.3.1 临床症状及死亡率 | 第44-45页 |
| 4.3.2 剖检变化 | 第45页 |
| 4.3.3 十二指肠病理组织学检测结果 | 第45-46页 |
| 4.3.4 十二指肠中TAP蛋白的免疫组化检测 | 第46页 |
| 4.3.5 盲肠中DEVUL6基因的拷贝数 | 第46-47页 |
| 4.3.6 MHCI类分子表达量变化 | 第47页 |
| 4.3.7 IFN-α表达量变化 | 第47-48页 |
| 4.3.8 IFN-β表达量变化 | 第48-49页 |
| 4.3.9 IFN-γ表达量变化 | 第49页 |
| 4.3.10 哈德氏腺中IgA表达量变化 | 第49-50页 |
| 4.3.11 胆汁中的IgA表达量变化 | 第50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 TAP单倍型SPF鸭免疫鸭瘟弱毒苗试验 | 第52-62页 |
| 5.1 材料 | 第52页 |
| 5.1.1 实验动物和毒株 | 第52页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第52页 |
| 5.2 方法 | 第52-54页 |
| 5.2.1 免疫 | 第52-53页 |
| 5.2.2 病变观察 | 第53页 |
| 5.2.3 盲肠中DEV拷贝数的定量PCR检测 | 第53页 |
| 5.2.4 外周血淋巴细胞(PBL)中CD4~+、CD8~+T淋巴细胞含量的流式细胞术分析 | 第53页 |
| 5.2.5 十二指肠中MHCI、IFN-α、IFN-β和IFN-γ转录水平的定量PCR检测 | 第53-54页 |
| 5.2.6 胆汁和哈德氏腺中IgA转录水平的定量PCR检测 | 第54页 |
| 5.2.7 十二指肠中TAP蛋白的免疫组化检测 | 第54页 |
| 5.3 结果 | 第54-60页 |
| 5.3.1 临床及剖检变化 | 第54页 |
| 5.3.2 PBL中CD4~+和CD8~+T淋巴细胞含量的动态变化 | 第54-55页 |
| 5.3.3 十二指肠组织学检测结果 | 第55-56页 |
| 5.3.4 十二指肠中TAP蛋白的免疫组化检测 | 第56页 |
| 5.3.5 盲肠中DEVUL6基因拷贝数 | 第56-57页 |
| 5.3.6 MHCI分子表达量变化 | 第57页 |
| 5.3.7 IFN-α表达量变化 | 第57-58页 |
| 5.3.8 IFN-β表达量变化 | 第58页 |
| 5.3.9 IFN-γ表达量变化 | 第58-59页 |
| 5.3.10 哈德氏腺中IgA的表达量变化 | 第59页 |
| 5.3.11 胆汁中IgA的表达量变化 | 第59-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
