| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 卤醇脱卤酶HHEC的研究现状和应用 | 第13-15页 |
| 1.1.1 卤醇脱卤酶HheC的脱卤和开环反应 | 第13-14页 |
| 1.1.2 卤醇脱卤酶HheC的应用 | 第14-15页 |
| 1.2 酶的改造 | 第15-17页 |
| 1.3 本论文研究的内容 | 第17-19页 |
| 第二章 CASTING文库的构建，筛选及结果分析 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 材料 | 第19页 |
| 2.1.2 实验仪器及设备 | 第19页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.2.1 结构指导的CASTing文库构建 | 第20-21页 |
| 2.2.2 改进的双突变位点PCR方法 | 第21-22页 |
| 2.2.3 初级文库脱卤活性的高通量筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.4 良性突变体的活性测量 | 第23页 |
| 2.2.5 良性突变体的动力学拆分 | 第23页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第23-29页 |
| 2.3.1 CASTing文库中突变体脱卤活性的提高 | 第23-24页 |
| 2.3.2 突变氨基酸位点的性质分析：底物结合位置的文库A，B，C | 第24-26页 |
| 2.3.3 突变氨基酸位点的性质分析：位于活性.袋入.处的文库D | 第26-27页 |
| 2.3.4 突变氨基酸位点的性质分析：位于卤离子结合位点的文库E | 第27页 |
| 2.3.5 CASTing文库立体选择性的变化趋势 | 第27-29页 |
| 2.4 本章总结 | 第29-31页 |
| 第三章 ISM文库的构建，筛选和突变体的分析 | 第31-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.2 实验仪器及设备 | 第31页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 ISM文库的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.2 ISM文库的PCR方法 | 第32-33页 |
| 3.2.3 ISM文库的高通量筛选 | 第33页 |
| 3.2.4 ISM文库突变体的动力学拆分 | 第33页 |
| 3.2.5 蛋白质纯化及浓度测定 | 第33-34页 |
| 3.2.6 分子模拟对接试验 | 第34页 |
| 3.2.7 稳态动力学参数测量 | 第34页 |
| 3.2.8 开环反应的动力学拆分 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第35-43页 |
| 3.3.1 ISM文库中突变体活性的改变 | 第35-36页 |
| 3.3.2 ISM文库立体选择性的逆转和提升 | 第36-38页 |
| 3.3.3 分子模拟对接实验 | 第38-39页 |
| 3.3.4 良性突变体的动力学参数变化 | 第39-40页 |
| 3.3.5 HheC开环反应立体选择性的初探 | 第40-42页 |
| 3.3.6 控制立体选择性关键位点的贡献 | 第42-43页 |
| 3.4 本章总结 | 第43-45页 |
| 第四章 总结及展望 | 第45-50页 |
| 4.1 总结 | 第45-46页 |
| 4.2 展望 | 第46-50页 |
| 4.2.1 针对不同类型环氧化物的开环立体选择性改造 | 第46-47页 |
| 4.2.2 卤醇脱卤酶参与的酶级联反应 | 第47-48页 |
| 4.2.3 计算机虚拟筛选体系的建立 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 攻硕期间的研究成果 | 第57-58页 |
