| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 拟南芥生长素信号途径 | 第13-16页 |
| 1.1 Auxin response factors(ARF) | 第14-16页 |
| 2 侧根的发育过程 | 第16-19页 |
| 3 拟南芥对外界NO_3~-的适应性研究进展 | 第19-25页 |
| 3.1 N源影响根结构的发育 | 第19-21页 |
| 3.2 NO_3~-信号途径 | 第21-23页 |
| 3.3 生长素信号与NO_3~-信号途径 | 第23-25页 |
| 第二章 研究工作 | 第25-73页 |
| 一、材料和方法 | 第25-49页 |
| 1 实验材料及试剂 | 第25-30页 |
| 1.1 植物材料以及生长条件 | 第25页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第25页 |
| 1.3 药品及其相关配制 | 第25-30页 |
| 1.3.1 试剂 | 第25-26页 |
| 1.3.2 各类试剂和培养基的配置 | 第26-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-49页 |
| 2.1 PCR法检测T-DNA突变株插入 | 第30-31页 |
| 2.1.1 原理 | 第30-31页 |
| 2.1.2 验证步骤 | 第31页 |
| 2.2 拟南芥种子的灭菌 | 第31-32页 |
| 2.3 Gateway系统构建表达载体 | 第32-37页 |
| 2.3.1 Gateway系统构建表达载体的原理 | 第32-33页 |
| 2.3.2 Q5高保真酶克隆基因的CDS序列 | 第33页 |
| 2.3.3 基因片段的纯化回收以及质粒的提取(fermentas试剂盒) | 第33-35页 |
| 2.3.4 BP反应和LR反应 | 第35页 |
| 2.3.5 CaCl_2法制备E. Coli感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.3.6 热击法转化E. Coli DH5α | 第36页 |
| 2.3.7 重组克隆的筛选 | 第36-37页 |
| 2.3.8 质粒酶切验证 | 第37页 |
| 2.3.9 测序并获得cDNA全长序列 | 第37页 |
| 2.4 拟南芥转化以及阳性植株的筛选 | 第37-39页 |
| 2.4.1 农杆菌感受态的制备 | 第37-38页 |
| 2.4.2 农杆菌的转化 | 第38页 |
| 2.4.3 转化 | 第38页 |
| 2.4.4 阳性植株的筛选 | 第38-39页 |
| 2.5 植物基因组DNA的提取 | 第39页 |
| 2.6 侧根原基数目的统计 | 第39-40页 |
| 2.7 酵母双杂交 | 第40-46页 |
| 2.7.1 酵母双杂交技术原理 | 第40-42页 |
| 2.7.2 酵母感受态的制备以及快速转化法 | 第42-43页 |
| 2.7.3 钓饵蛋白自身激活报告基因的活性检测 | 第43页 |
| 2.7.4 文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母 | 第43-45页 |
| 2.7.5 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第45页 |
| 2.7.6 阳性克隆酵母的质粒的提取 | 第45-46页 |
| 2.7.7 阳性克隆酵母质粒转化大肠杆菌DH5α | 第46页 |
| 2.7.8 含有阳性克隆酵母质粒的大肠杆菌送去测序 | 第46页 |
| 2.8 双分子荧光互补实验 | 第46-49页 |
| 2.8.1 双分子荧光互补的实验原理 | 第46-47页 |
| 2.8.2 双分子荧光互补的实验过程 | 第47-49页 |
| 2.8.2.1 构建荧光互补载体 | 第47页 |
| 2.8.2.2 电击农杆菌感受态的制备及转化 | 第47-48页 |
| 2.8.2.3 转染烟草 | 第48-49页 |
| 二、实验结果和分析 | 第49-73页 |
| 1 arfn和arf8的纯系鉴定以及表型分析 | 第49-64页 |
| 1.1 突变体纯系的鉴定 | 第49-50页 |
| 1.1.1 arfn、arf8突变体纯系的鉴定 | 第49-50页 |
| 1.1.2 arfn/arf8双突变体的获得 | 第50页 |
| 1.1.2.1 arfn与arf8的杂交 | 第50页 |
| 1.1.2.2 arfn/arf8双突变体纯系的鉴定 | 第50页 |
| 1.2 超表达纯系植株的获得 | 第50-52页 |
| 1.3 arfn、arf8以及arfn/arf8双突变体表型的分析 | 第52-57页 |
| 1.3.1 arfn侧根表型 | 第52-53页 |
| 1.3.2 ARFn的表达模式 | 第53-55页 |
| 1.3.3 arfn对于NAA的响应 | 第55-57页 |
| 1.4 Col对于不同浓度的氮源的反应 | 第57-61页 |
| 1.4.1 Col对于不同浓度的NO_3~-的表型分析 | 第57-59页 |
| 1.4.2 Col在不同浓度下的NO_3~-的生长素响应 | 第59-61页 |
| 1.4.2.1 不同浓度的NO_3~-处理下DR5：：GFP在主根上的表达 | 第59-61页 |
| 1.4.2.2 不同浓度的NOr下DR5::GFP在侧根上的表达 | 第61页 |
| 1.5 arfn、arf8对不同浓度的氮源响应的表型分析 | 第61-63页 |
| 1.6 ARFn对于不同N源浓度的响应 | 第63-64页 |
| 2 ARFn互作蛋白的筛选 | 第64-70页 |
| 2.1 酵母穿梭载体的构建 | 第64-65页 |
| 2.2 酵母感受态的制备以及快速转化法 | 第65页 |
| 2.3 钓饵蛋白自身激活报告基因的活性检测 | 第65-66页 |
| 2.4 库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母 | 第66页 |
| 2.5 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第66-68页 |
| 2.6 阳性克隆酵母的质粒的提取 | 第68页 |
| 2.7 阳性克隆酵母质粒转化大肠杆菌DH5α | 第68页 |
| 2.8 筛选出的可能互作蛋白反向验证 | 第68-70页 |
| 2.8.1 筛选出的可能互作蛋白反向验证所需载体的构建 | 第68-69页 |
| 2.8.2 筛选出的可能互作蛋白反向验证 | 第69-70页 |
| 3 双分子荧光互补实验 | 第70-72页 |
| 3.1 构建荧光互补载体 | 第70-71页 |
| 3.2 ARFn与IAA17、IAA27体内的互作验证 | 第71-72页 |
| 4 IAA17突变体的表型分析 | 第72-73页 |
| 第三章 讨论 | 第73-77页 |
| 发表文献 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 学位论文评闻及答辩情况表 | 第86页 |
