| 中文摘要 | 第3-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩略词对照表 | 第15-23页 |
| 第一部分 结核亚单位疫苗免疫方案和IL-7、IL-15对T细胞免疫记忆的影响 | 第23-87页 |
| 第一章 前言 | 第23-29页 |
| 1.1 结核病的研究现状 | 第23-24页 |
| 1.2 结核疫苗的研究现状 | 第24-27页 |
| 1.3 影响T细胞免疫记忆的因素 | 第27-29页 |
| 第二章 结核亚单位疫苗免疫接种间隔对T细胞免疫记忆影响的研究 | 第29-53页 |
| 2.1 引言 | 第29-30页 |
| 2.1.1 免疫策略对长效免疫记忆的影响 | 第29-30页 |
| 2.1.2 选题思路和研究内容 | 第30页 |
| 2.2 本研究的材料与方法 | 第30-42页 |
| 2.2.1 实验材料和仪器设备 | 第30-37页 |
| 2.2.1.1 实验动物 | 第30页 |
| 2.2.1.2 主要实验耗材 | 第30-31页 |
| 2.2.1.3 主要实验试剂 | 第31页 |
| 2.2.1.4 仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 主要试剂的配置 | 第32-36页 |
| 2.2.1.6 蛋白SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第37-42页 |
| 2.2.2.1 Ag85B、Rv2626c和HspX蛋白的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 BCA法蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| 2.2.2.3 实验动物分组 | 第38页 |
| 2.2.2.4 免疫用亚单位疫苗LT70-DDA/PolyI:C的配制 | 第38页 |
| 2.2.2.5 免疫接种方案 | 第38页 |
| 2.2.2.6 免疫指标的检测方法 | 第38-41页 |
| 2.2.2.6.1 小鼠脾脏淋巴细胞的分离 | 第38-39页 |
| 2.2.2.6.2 淋巴细胞培养上清细胞因子IL-2和IFN-γ分泌水平的测定 | 第39页 |
| 2.2.2.6.3 T细胞IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平的测定 | 第39页 |
| 2.2.2.6.4 延长ELISPOT法中央记忆样T细胞的数目的测定 | 第39-40页 |
| 2.2.2.6.5 两次抗原刺激后IFN-γ分泌水平的测定 | 第40页 |
| 2.2.2.6.6 EdU法脾脏淋巴细胞增殖水平的测定 | 第40-41页 |
| 2.2.2.6.7 血清中Ag85B特异性抗体IgG1水平的测定 | 第41页 |
| 2.2.2.7 BCG攻击后保护效果的评价 | 第41-42页 |
| 2.2.2.8 统计学分析 | 第42页 |
| 2.3 实验结果 | 第42-50页 |
| 2.3.1 Ag85B、Rv2626c和HspX蛋白的表达与纯化 | 第42-43页 |
| 2.3.2 不同免疫方案对体液免疫应答IgG1水平的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.3 不同免疫方案对抗原特异性T细胞免疫应答的影响 | 第44-50页 |
| 2.3.3.1 不同免疫方案对Th1型细胞因子水平的影响 | 第44-47页 |
| 2.3.3.2 不同免疫方案对中央记忆样T细胞的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.3.3 不同免疫方案对T细胞增殖能力的影响 | 第48-50页 |
| 2.3.4 不同免疫方案对保护效率的影响 | 第50页 |
| 2.4 讨论 | 第50-52页 |
| 2.5 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 IL-7和IL-15对结核亚单位疫苗T细胞免疫记忆影响的研究 | 第53-87页 |
| 3.1 引言 | 第53-57页 |
| 3.1.1 疫苗佐剂的研究现状 | 第53-54页 |
| 3.1.2 IL-7和IL-15对T细胞免疫记忆的影响 | 第54-55页 |
| 3.1.3 腺病毒包装系统的选取 | 第55-56页 |
| 3.1.4 选题思路和研究内容 | 第56-57页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第57-70页 |
| 3.2.1 实验材料和仪器设备 | 第57-62页 |
| 3.2.1.1 实验动物 | 第57页 |
| 3.2.1.2 主要实验耗材 | 第57-58页 |
| 3.2.1.3 主要实验试剂 | 第58页 |
| 3.2.1.4 仪器设备 | 第58-59页 |
| 3.2.1.5 主要试剂的配置 | 第59-62页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第62-70页 |
| 3.2.2.1 重组基因载体pDC316-IL-7、pDC316-IL-15、pDC316-IL-7-IL-15和pDC316-IL-7-IL-15(Linker)的构建 | 第62-70页 |
| 3.2.2.1.1 PCR扩增IL-7、IL-15及IL-7-linkerCDS区 | 第62-63页 |
| 3.2.2.1.2 将IL-7、IL-15及IL-7-linker片段连接到载体.. | 第63页 |
| 3.2.2.1.3 重组腺病毒rAd-IL-7、rAd-IL-15、rAd-IL-7-IL-15和rAd-IL-7-IL-15(Linker)及腺病毒空载体pDC316(rAd-vector)的包装及鉴定 | 第63-67页 |
| 3.2.2.1.3.1 准备进行转染的质粒 | 第63-64页 |
| 3.2.2.1.3.2 HEK293细胞的准备 | 第64页 |
| 3.2.2.1.3.3 重组腺病毒rAd-IL-7、rAd-IL-15、rAd-IL-7-IL-15、rAd-IL-7-IL-15(Linker)及空载体rAd-vector的包装 | 第64-66页 |
| 3.2.2.1.3.4 重组腺病毒rAd-IL-7、rAd-IL-15、rAd-IL-7-IL-15、rAd-IL-7-IL-15(Linker)及空载体rAd-vector滴度的测定 | 第66-67页 |
| 3.2.2.2 实验动物分组 | 第67页 |
| 3.2.2.3 免疫用亚单位疫苗LT70+MH的配制 | 第67页 |
| 3.2.2.4 免疫接种方案 | 第67-68页 |
| 3.2.2.5 免疫指标的检测方法 | 第68-70页 |
| 3.2.2.5.1 小鼠骨髓淋巴细胞的分离 | 第68页 |
| 3.2.2.5.2 延长ELISPOT法中央记忆样T细胞的数目的测定.. | 第68-69页 |
| 3.2.2.5.3 两次抗原刺激后IFN-γ分泌水平的测定 | 第69页 |
| 3.2.2.5.4 EdU法脾脏淋巴细胞增殖水平的测定 | 第69页 |
| 3.2.2.5.5 TB10.44-12Pentamer检测脾脏淋巴细胞TB10.4特异性CD8+TM | 第69-70页 |
| 3.2.2.6 BCG攻击后保护效果的评价 | 第70页 |
| 3.2.2.7 统计学分析 | 第70页 |
| 3.3 实验结果 | 第70-83页 |
| 3.3.1 重组质粒pDC316-IL-7、pDC316-IL-15、pDC316-IL-7-IL-15和pDC316-IL-7-IL-15(Linker)的构建 | 第70-73页 |
| 3.3.2 重组腺病毒的包装、鉴定和滴度的测定 | 第73-75页 |
| 3.3.3 IL-7和IL-15对抗原特异性T细胞免疫应答的影响 | 第75-82页 |
| 3.3.3.1 IL-7和IL-15对中央记忆样T细胞的影响 | 第75-79页 |
| 3.3.3.2 IL-7和IL-15对形成的中央记忆样T细胞增殖能力的影响 | 第79-80页 |
| 3.3.3.3 IL-7和IL-15对TB10.4特异性的CD8+TM细胞数目的影响 | 第80-82页 |
| 3.3.4 IL-7和IL-15对免疫保护效果的影响 | 第82-83页 |
| 3.4 讨论 | 第83-86页 |
| 3.5 小结 | 第86-87页 |
| 第二部分 IL-7和IL-15对小鼠U14宫颈癌的免疫治疗作用的研究 | 第87-104页 |
| 4.1 研究背景 | 第87-90页 |
| 4.1.1 宫颈癌的研究现状 | 第87页 |
| 4.1.2 IL-7和IL-15在癌症免疫治疗中的的应用 | 第87-89页 |
| 4.1.3 选题思路和研究内容 | 第89-90页 |
| 4.2 材料与方法 | 第90-94页 |
| 4.2.1 主要实验仪器和材料 | 第90-92页 |
| 4.2.1.1 U14细胞株 | 第90页 |
| 4.2.1.2 实验动物 | 第90页 |
| 4.2.1.3 主要实验耗材 | 第90-91页 |
| 4.2.1.4 主要实验试剂 | 第91页 |
| 4.2.1.5 主要仪器设备 | 第91页 |
| 4.2.1.6 常用试剂的配置 | 第91-92页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第92-94页 |
| 4.2.2.1 腺病毒扩增和滴度的测定 | 第92页 |
| 4.2.2.2 实验动物分组 | 第92-93页 |
| 4.2.2.3 动物处理流程 | 第93页 |
| 4.2.2.4 移植瘤体积的测定 | 第93页 |
| 4.2.2.5 免疫指标的检测 | 第93-94页 |
| 4.2.2.5.1 淋巴细胞表面PD-1表达水平的检测 | 第93页 |
| 4.2.2.5.2 淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg的检测 | 第93-94页 |
| 4.2.2.5.3 小鼠血清IFN-γ分泌水平的检测 | 第94页 |
| 4.2.2.5.4 小鼠淋巴细胞活力的检测 | 第94页 |
| 4.3 实验结果 | 第94-100页 |
| 4.3.1 U14宫颈癌皮下移植瘤模型的建立以及治疗流程 | 第94-95页 |
| 4.3.2 rAd-IL-7和rAd-IL-15对U14宫颈癌模型小鼠瘤体积变化的影响 | 第95页 |
| 4.3.3 rAd-IL-7和rAd-IL-15对U14宫颈癌模型小鼠脾脏淋巴细胞Treg的调节作用 | 第95-96页 |
| 4.3.4 rAd-IL-7和rAd-IL-15治疗对T细胞表面PD-1表达水平的影响 | 第96-98页 |
| 4.3.5 rAd-IL-7和rAd-IL-15对U14宫颈癌模型小鼠血清IFN-γ水平的影响 | 第98-99页 |
| 4.3.6 rAd-IL-7和rAd-IL-15对U14宫颈癌模型小鼠淋巴细胞活力的影响 | 第99-100页 |
| 4.4 讨论 | 第100-102页 |
| 4.5 小结 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-118页 |
| 在学期间的研究成果 | 第118-119页 |
| 致谢 | 第119页 |
