| 摘要 | 第9-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第18-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-34页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 1 卵泡发育 | 第20-22页 |
| 1.1 卵泡发育过程 | 第20-21页 |
| 1.2 卵泡闭锁 | 第21页 |
| 1.3 卵泡发育调控机制 | 第21-22页 |
| 2 microRNA的基本特征 | 第22-25页 |
| 2.1 microRNA的发现 | 第22-23页 |
| 2.2 microRNA的生物合成 | 第23-24页 |
| 2.3 microRNA的作用机制 | 第24页 |
| 2.4 microRNA的研究手段 | 第24-25页 |
| 2.4.1 化学合成microRNA模拟物和抑制物 | 第24-25页 |
| 2.4.2 microRNA靶基因的筛选和验证 | 第25页 |
| 3 microRNA在卵泡发育过程中的作用研究进展 | 第25-28页 |
| 3.1 microRNA参与调控卵泡发育和类固醇激素合成 | 第26-27页 |
| 3.2 microRNA参与调控卵泡成熟排卵和黄体化 | 第27-28页 |
| 4 本文所选microRNA的研究进展 | 第28-30页 |
| 4.1 miR-15a和miR-16的研究进展 | 第28-29页 |
| 4.2 miR-133a的研究进展 | 第29-30页 |
| 4.3 miR-410、miR-485和miR-495的研究进展 | 第30页 |
| 5 细胞周期检验点蛋白Chk1/2 的研究进展 | 第30-31页 |
| 5.1 Chk1/2 的活化和主要功能 | 第30-31页 |
| 5.2 Chk1/2 的研究手段 | 第31页 |
| 6 p53和SUMO-1 蛋白在卵巢生理过程中的作用研究进展 | 第31-33页 |
| 6.1 p53在卵巢生理功能中的作用 | 第31-32页 |
| 6.2 SUMO-1 在卵巢生理功能中的作用 | 第32-33页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 microRNA对小鼠腔前卵泡发育和颗粒细胞增殖、凋亡的作用和调控机制研究 | 第34-92页 |
| 1 引言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-54页 |
| 2.1 材料 | 第34-40页 |
| 2.1.1 用于microRNAs功能研究的miRNA模拟物 | 第34-35页 |
| 2.1.2 荧光素酶报告基因载体 | 第35-36页 |
| 2.1.3 生化试剂和抗体 | 第36-37页 |
| 2.1.4 实验所需溶液和配方 | 第37-38页 |
| 2.1.5 实验仪器设备 | 第38-40页 |
| 2.2 方法 | 第40-54页 |
| 2.2.1 本实验的技术路线 | 第40页 |
| 2.2.2 小鼠腔前卵泡的分离培养和处理 | 第40-41页 |
| 2.2.3 小鼠卵巢颗粒细胞的分离培养和处理 | 第41-42页 |
| 2.2.4 小鼠卵泡RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第42-44页 |
| 2.2.5 小鼠卵巢颗粒细胞RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第44-45页 |
| 2.2.6 miRNA的表达分析 | 第45-46页 |
| 2.2.7 mRNA的表达分析 | 第46-47页 |
| 2.2.8 颗粒细胞的增殖检测 | 第47页 |
| 2.2.9 颗粒细胞的细胞周期检测 | 第47-48页 |
| 2.2.10 颗粒细胞的凋亡检测 | 第48页 |
| 2.2.11 颗粒细胞雌激素分泌水平的检测 | 第48页 |
| 2.2.12 miRNA靶基因的预测 | 第48页 |
| 2.2.13 荧光素酶报告基因实验 | 第48-51页 |
| 2.2.14 RT-PCR检测靶基因mRNA水平的表达情况 | 第51-52页 |
| 2.2.15 Western blot检测靶基因蛋白水平的表达情况 | 第52-54页 |
| 2.3 统计分析 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-84页 |
| 3.1 六种microRNAs在小鼠卵泡内的表达规律 | 第54-56页 |
| 3.2 六种microRNAs在小鼠卵泡体外发育和颗粒细胞生长过程中的作用研究 | 第56-73页 |
| 3.2.1 miR-410在小鼠颗粒细胞生长过程中的作用 | 第56-58页 |
| 3.2.2 miR-485在小鼠卵泡体外发育和颗粒细胞生长过程中的作用 | 第58-62页 |
| 3.2.3 miR-495在小鼠卵泡体外发育和颗粒细胞生长过程中的作用 | 第62-66页 |
| 3.2.4 miR-133a在小鼠卵泡体外发育和颗粒细胞生长过程中的作用 | 第66-70页 |
| 3.2.5 miR-15a和miR-16在小鼠卵泡体外发育和颗粒细胞生长过程中的作用 | 第70-73页 |
| 3.3 microRNAs 在颗粒细胞雌激素分泌过程中的作用 | 第73-75页 |
| 3.4 FSH和LH对microRNAs在小鼠卵巢颗粒细胞内表达规律的影响 | 第75-77页 |
| 3.4.1 FSH对microRNAs表达规律的影响 | 第75-76页 |
| 3.4.2 LH对microRNAs表达规律的影响 | 第76-77页 |
| 3.5 microRNAs靶基因预测和验证结果 | 第77-84页 |
| 3.5.1 候选microRNAs的靶基因预测结果 | 第77-78页 |
| 3.5.2 荧光素酶报告系统检测microRNAs同靶基因的互作结果 | 第78-81页 |
| 3.5.3 microRNAs对靶基因的基因和蛋白水平表达影响 | 第81-84页 |
| 4 讨论 | 第84-91页 |
| 4.1 microRNA的表达受促性腺激素的调控 | 第84-87页 |
| 4.1.1 FSH调控筛选microRNAs的表达 | 第86页 |
| 4.1.2 LH调控筛选microRNAs的表达 | 第86-87页 |
| 4.2 microRNA参与调控腔前卵泡的体外发育和颗粒细胞的生长 | 第87-90页 |
| 4.2.1 microRNA参与调控腔前卵泡的体外发育 | 第87-88页 |
| 4.2.2 microRNA参与调控颗粒细胞的增殖和凋亡 | 第88-89页 |
| 4.2.3 microRNA参与调控颗粒细胞雌激素的分泌 | 第89-90页 |
| 4.3 microRNA靶基因的筛选和验证 | 第90-91页 |
| 5 小结 | 第91-92页 |
| 第三章 Chk1/2 对小鼠腔前卵泡体外发育，卵母细胞成熟和颗粒细胞生长的影响和调控机制研究 | 第92-116页 |
| 1 引言 | 第92页 |
| 2 材料与方法 | 第92-100页 |
| 2.1 材料 | 第92-94页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第92页 |
| 2.1.2 主要生化试剂和抗体 | 第92-93页 |
| 2.1.3 实验所需溶液和配方 | 第93页 |
| 2.1.4 实验仪器设备 | 第93-94页 |
| 2.2 方法 | 第94-100页 |
| 2.2.1 本实验的技术路线 | 第94-95页 |
| 2.2.2 卵母细胞收集培养和抑制剂处理 | 第95-96页 |
| 2.2.3 激光共聚焦检测卵母细胞中蛋白定位 | 第96-97页 |
| 2.2.4 卵母细胞染色体爬片 | 第97页 |
| 2.2.5 小鼠腔前卵泡的分离培养和抑制剂处理 | 第97-98页 |
| 2.2.6 小鼠颗粒细胞的分离培养和抑制剂处理 | 第98页 |
| 2.2.7 颗粒细胞的增殖检测 | 第98页 |
| 2.2.8 颗粒细胞的细胞周期检测 | 第98页 |
| 2.2.9 颗粒细胞的细胞凋亡水平检测 | 第98页 |
| 2.2.10 Western blot检测蛋白水平的表达情况 | 第98-99页 |
| 2.2.11 RT-PCR检测基因mRNA水平的表达情况 | 第99页 |
| 2.2.12数据分析 | 第99-100页 |
| 3 结果 | 第100-112页 |
| 3.1 Chk1/2 对小鼠腔前卵泡体外发育的影响 | 第100页 |
| 3.2 抑制Chk1/2 诱导颗粒细胞的凋亡 | 第100页 |
| 3.3 抑制Chk1/2 的活性阻碍颗粒细胞的增殖 | 第100-103页 |
| 3.4 抑制Chk1/2 阻滞颗粒细胞周期在S期和G2/M期 | 第103-105页 |
| 3.5 抑制Chk1/2 导致小鼠卵母细胞第一极体排放缺陷 | 第105-106页 |
| 3.6 Chk1/2 在小鼠卵母第一次减数分裂中期前发挥作用 | 第106页 |
| 3.7 Chk1/2 通过调控phospho-P38-MAPK的表达参与调控卵母细胞纺锤体组装 | 第106-108页 |
| 3.8 抑制Chk1/2 导致染色体凝集异常和Securin定位紊乱 | 第108-110页 |
| 3.9 Chk1/2 维持MII期卵母细胞纺锤体结构 | 第110页 |
| 3.10 Chk1/2 参与调控MII期卵母细胞第二极体排放和原核形成 | 第110-112页 |
| 4 讨论 | 第112-115页 |
| 4.1 Chk1/2 通过影响颗粒细胞的生长参与调控腔前卵泡的发育 | 第112-113页 |
| 4.2 Chk1/2 参与调控卵母细胞减数分裂 | 第113-114页 |
| 4.3 抑制Chk1/2 影响纺锤体的组装和染色体的凝集 | 第114-115页 |
| 4.4 Chk1/2 在成熟卵母细胞后期发育过程中发挥重要作用 | 第115页 |
| 5 小结 | 第115-116页 |
| 第四章 全文结论 | 第116-118页 |
| 第五章 创新点与不足 | 第118-119页 |
| 创新点 | 第118页 |
| 不足之处 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-135页 |
| 发表的主要论文 | 第135-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
