| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-18页 |
| ·CLA 的结构 | 第10页 |
| ·共轭亚油酸(CLA)的研究历程 | 第10-11页 |
| ·CLA 的生理功能 | 第11-13页 |
| ·抗癌作用 | 第11-12页 |
| ·抗粥状动脉硬化 | 第12页 |
| ·增强免疫力 | 第12页 |
| ·调控脂肪的代谢 | 第12-13页 |
| ·其他作用 | 第13页 |
| ·CLA 的合成 | 第13-14页 |
| ·化学法合成 | 第13-14页 |
| ·蓖麻油合成 CLA | 第13页 |
| ·油酸烯丙醇脱水 | 第13页 |
| ·碱异构化 | 第13-14页 |
| ·生物法合成 | 第14页 |
| ·亚油酸异构酶的作用机理 | 第14-15页 |
| ·异构酶基因的研究状况 | 第15-16页 |
| ·本试验的研究内容及目的和意义 | 第16-17页 |
| ·实验流程 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·菌种、质粒 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·试剂 | 第18-19页 |
| ·提取基因组 DNA 所需试剂 | 第18-19页 |
| ·嗜酸乳杆菌 NCFM1651DNA 扩增所需试剂 | 第19页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳所需试剂 | 第19页 |
| ·酶及生化试剂 | 第19页 |
| ·其它试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-30页 |
| ·嗜酸乳杆菌株的分离与鉴定 | 第20-23页 |
| ·CLA 紫外吸收标准曲线的制定 | 第20页 |
| ·嗜酸乳杆菌的分离及 CLA 生产量测定 | 第20页 |
| ·引物的合成 | 第20-21页 |
| ·嗜酸乳杆菌株基因组 DNA 的提取 | 第21页 |
| ·PCR 扩增及凝胶回收 | 第21-22页 |
| ·感受态的制备 | 第22-23页 |
| ·目的片段的连接及转化 | 第23页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第23页 |
| ·序列测定 | 第23页 |
| ·亚油酸异构酶基因的提取 | 第23-25页 |
| ·引物的设计 | 第23-24页 |
| ·嗜酸乳杆菌共轭亚油酸异构酶基因的PCR 扩增 | 第24页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收(用胶回收试剂盒) | 第24-25页 |
| ·LAI 基因与pMD19-T 连接转化及检测 | 第25-26页 |
| ·LAI 基因与pMD19-T 的连接转化 | 第25页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组表达质粒pMG36e-LAI 的构建及转化 | 第26-27页 |
| ·pMG36e 表达载体的提取 | 第26页 |
| ·重组质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的检测 | 第27页 |
| ·嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的外源表达 | 第27-30页 |
| ·pMG36e-LAI-DH5α菌株的酶活测定 | 第27页 |
| ·亚油酸异构酶的分离提取 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-40页 |
| ·CLA 高产菌株的筛选 | 第30-32页 |
| ·CLA 标准曲线的绘制 | 第30页 |
| ·CLA 高产菌株的分离及鉴定 | 第30-32页 |
| ·菌株的筛选 | 第30页 |
| ·菌株的鉴定 | 第30-32页 |
| ·嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的克隆 | 第32-37页 |
| ·亚油酸异构酶基因的获得 | 第32-37页 |
| ·嗜酸乳杆菌 NCFM 基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·LAI 基因的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·LAI 基因与pMD19-T 载体的连接转化检测 | 第33-36页 |
| ·pMG36e 质粒的提取 | 第36页 |
| ·pMG36e-LAI 质粒的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| ·嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因的表达 | 第37-40页 |
| ·菌株催化 LA 转化为 CLA 的活性测定 | 第37页 |
| ·分离纯化后 LAI 的活力测定 | 第37-39页 |
| ·测定纯化后的 LAI 分子量 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 作者简介 | 第47页 |