| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| 1.1 长效干扰素的研究 | 第9-11页 |
| 1.1.1 干扰素简介 | 第9页 |
| 1.1.2 长效干扰素的研究 | 第9-11页 |
| 1.2 中国仓鼠卵巢细胞表达系统的概述 | 第11-13页 |
| 1.2.1 不同表达系统的研究 | 第11-12页 |
| 1.2.2 中国仓鼠卵巢细胞表达系统的优点 | 第12页 |
| 1.2.3 高效稳定的CHO表达系统策略的建立 | 第12-13页 |
| 1.3 无血清培养基的研究 | 第13-16页 |
| 1.3.1 无血清培养基的发展过程 | 第13页 |
| 1.3.2 无血清培养基中的添加因子 | 第13-14页 |
| 1.3.3 无血清培养基的优化以及个性化 | 第14-15页 |
| 1.3.4 无血清培养基的悬浮适应 | 第15-16页 |
| 1.4 细胞培养工艺的研究 | 第16-17页 |
| 1.4.1 细胞培养的模式 | 第16-17页 |
| 1.4.2 动物细胞大规模培养过程参数 | 第17页 |
| 1.5 立题意义和研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株、细胞株、质粒及引物 | 第19页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基及溶液配制 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 CHO细胞的培养与保种 | 第21-22页 |
| 2.2.2 CHO重组细胞的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.3 重组细胞的构建与筛选 | 第23-24页 |
| 2.2.4 细胞的悬浮驯化 | 第24页 |
| 2.2.5 细胞批次培养实验 | 第24-25页 |
| 2.2.6 细胞稳定性验证 | 第25页 |
| 2.2.7 蛋白检测方法 | 第25-26页 |
| 2.2.8 基础培养基批次筛选 | 第26页 |
| 2.2.9 流加培养基筛选实验 | 第26页 |
| 2.2.10 特殊因子的添加以及丁酸钠的流加培养 | 第26页 |
| 2.2.11 细胞周期测定 | 第26页 |
| 2.2.12 RNA提取和荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.2.13 细胞培养过程中生化指标测定 | 第27页 |
| 2.2.14 摇瓶的 3 L流加培养 | 第27页 |
| 2.2.15 使用AP-20 一次性生物反应器 5 L流加培养 | 第27页 |
| 2.2.16 融合蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.17 纯化样品纯度检测 | 第28页 |
| 2.2.18 纯化样品的生物活性检测 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-46页 |
| 3.1 融合蛋白表达质粒构建 | 第29页 |
| 3.2 重组CHO细胞的构建与筛选 | 第29-32页 |
| 3.2.1 CHO细胞株的构建及高克隆筛选 | 第29-31页 |
| 3.2.2 重组CHO细胞悬浮驯化和批次实验 | 第31页 |
| 3.2.3 重组细胞稳定性实验 | 第31-32页 |
| 3.3 无血清培养基的筛选优化 | 第32-39页 |
| 3.3.1 基础培养基的初筛和混合测试 | 第32-34页 |
| 3.3.2 流加培养基筛选 | 第34-35页 |
| 3.3.3 特殊因子的添加对细胞影响 | 第35-36页 |
| 3.3.4 丁酸钠的添加对细胞影响 | 第36-39页 |
| 3.4 摇瓶的 3 L流加培养和 5 L一次性生物反应器的流加培养 | 第39-41页 |
| 3.4.1 摇瓶的 3 L流加培养 | 第39-40页 |
| 3.4.2 AP-20 一次性 5 L激流生物反应器流加培养 | 第40-41页 |
| 3.5 HSA-IFNα2b的分离纯化 | 第41-43页 |
| 3.5.1 Blue Sepharose FF亲和层析 | 第41-42页 |
| 3.5.2 Phenyl Sepharose FF疏水层析 | 第42-43页 |
| 3.6 HSA-IFNα2b的检测 | 第43-46页 |
| 3.6.1 纯化样品纯度检测 | 第43-44页 |
| 3.6.2 纯化后样品Western Blot验证 | 第44页 |
| 3.6.3 纯化样品生物活性检测 | 第44-45页 |
| 3.6.4 纯化样品分子量检测 | 第45-46页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第46-47页 |
| 4.1 主要结论 | 第46页 |
| 4.2 下一步研究工作展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
