| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 英文缩写词 | 第20-21页 |
| 第一章 绪论 | 第21-36页 |
| 1.1 丙型肝炎 | 第21页 |
| 1.2 丙型肝炎病毒生物学特性 | 第21-25页 |
| 1.2.1 HCV的结构及功能 | 第22-23页 |
| 1.2.2 HCV的生活周期 | 第23-24页 |
| 1.2.3 HCV的复制及致病机制 | 第24-25页 |
| 1.2.3.1 CD81受体 | 第24-25页 |
| 1.2.3.2 Occludin受体 | 第25页 |
| 1.2.3.3 SR-BI受体 | 第25页 |
| 1.2.3.4 Claudin-1受体 | 第25页 |
| 1.3 丙型肝炎的免疫学特征 | 第25-27页 |
| 1.3.1 固有免疫 | 第25-26页 |
| 1.3.2 体液免疫 | 第26-27页 |
| 1.3.3 细胞免疫 | 第27页 |
| 1.3.4 HCV病毒对机体免疫的作用 | 第27页 |
| 1.4 丙型肝炎的传播途径、预防及治疗 | 第27-28页 |
| 1.4.1 传播途径 | 第27-28页 |
| 1.4.2 预防及治疗 | 第28页 |
| 1.5 丙型肝炎病毒动物模型研究近况 | 第28-31页 |
| 1.5.1 HCV自然感染的动物模型 | 第28-30页 |
| 1.5.1.1 黑猩猩模型 | 第29页 |
| 1.5.1.2 树鼩模型 | 第29-30页 |
| 1.5.2 替代性自然感染模型 | 第30页 |
| 1.5.3 HCV非自然感染模型 | 第30-31页 |
| 1.6 丙型肝炎病毒细胞模型研究近况 | 第31-32页 |
| 1.6.1 肝源细胞模型 | 第31-32页 |
| 1.6.2 非肝源细胞模型 | 第32页 |
| 1.7 原代细胞的分离及培养 | 第32-34页 |
| 1.7.1 原代细胞悬液的制备方法 | 第32-33页 |
| 1.7.1.1 物理方法 | 第32-33页 |
| 1.7.1.2 化学方法 | 第33页 |
| 1.7.1.3 生物方法 | 第33页 |
| 1.7.2 原代细胞的培养方法 | 第33-34页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第34-35页 |
| 1.9 实验技术路线 | 第35-36页 |
| 第二章 HCV对树鼩原代肝细胞感染特性研究 | 第36-56页 |
| 2.1 引言 | 第36-37页 |
| 2.2 材料与方法 | 第37-48页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.2.2 实验试剂及配方 | 第37-38页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第38页 |
| 2.2.4 树鼩原代肝细胞的分离及培养 | 第38-40页 |
| 2.2.5 MTT法检测PTH的增殖情况 | 第40-41页 |
| 2.2.6 Huh7.5.1细胞及HCV的培养 | 第41页 |
| 2.2.7 HCV病毒载量及滴度检测 | 第41-42页 |
| 2.2.8 不同感染复数对PTH的作用 | 第42页 |
| 2.2.9 HCV感染Huh7.5.1、PTH、HepG2及样本收集 | 第42页 |
| 2.2.10 HCV的核酸和蛋白检测 | 第42-48页 |
| 2.3 实验结果 | 第48-53页 |
| 2.3.1 树鼩原代肝细胞生长状态跟踪观察 | 第48-49页 |
| 2.3.2 树鼩原代肝细胞的生长曲线 | 第49页 |
| 2.3.3 Huh7.5.1细胞培养病毒的病毒载量及滴度检测 | 第49-50页 |
| 2.3.4 不同感染复数对PTH细胞生长的影响 | 第50-51页 |
| 2.3.5 HCV对PTH感染特性研究 | 第51-53页 |
| 2.3.5.1 HCV感染PTH上清的定性检测 | 第51-52页 |
| 2.3.5.2 HCV感染PTH上清的定量检测 | 第52页 |
| 2.3.5.3 HCV感染PTH细胞中NS3蛋白检测 | 第52-53页 |
| 2.4 讨论 | 第53-55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章 树鼩肝脏特异性表达载体的构建 | 第56-75页 |
| 3.1 引言 | 第56-57页 |
| 3.2 材料与方法 | 第57-66页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第57页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.2.3 PALB序列预测 | 第58页 |
| 3.2.4 PALB序列的扩增 | 第58-61页 |
| 3.2.5 EGFP序列的扩增及纯化 | 第61-62页 |
| 3.2.6 Plive-hCD81和Plive-hOCLN质粒提取 | 第62页 |
| 3.2.7 目的片段及质粒酶切 | 第62-64页 |
| 3.2.8 连接反应 | 第64页 |
| 3.2.9 重组质粒的转化 | 第64-65页 |
| 3.2.10 重组质粒验证 | 第65-66页 |
| 3.3 实验结果 | 第66-72页 |
| 3.3.1 在线数预测评分表 | 第66页 |
| 3.3.2 启动子序列的扩增 | 第66-67页 |
| 3.3.3 重组Plive-P_(ALB)-hCD81/hOCLN载体的构建 | 第67页 |
| 3.3.4 重组Plive-P_(ALB)-hCD81/hOCLN载体阳性克隆的筛选及鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3.5 双酶切鉴定重组Plive-P_(ALB)-hCD81/hOCLN载体 | 第68-69页 |
| 3.3.6 测序鉴定重组Plive-P_(ALB)-hCD81/hOCLN载体 | 第69-70页 |
| 3.3.7 EGFP片段的扩增 | 第70-71页 |
| 3.3.8 重组Plive-P_(ALB)-hCD81(hOCLN)-EGFP载体阳性克隆的筛选及鉴定 | 第71-72页 |
| 3.3.9 测序鉴定重组Plive-P_(ALB)-hCD81(hOCLN)-EGFP载体 | 第72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-74页 |
| 3.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第四章 肝组织特异性表达载体特异性研究 | 第75-92页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 材料与方法 | 第76-84页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第76页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第76-77页 |
| 4.2.3 质粒提取 | 第77-78页 |
| 4.2.4 肝组织总RNA的提取 | 第78页 |
| 4.2.5 RNA质量检测 | 第78-79页 |
| 4.2.6 体内转染 | 第79页 |
| 4.2.6.1 树鼩体内转染肝组织特异性载体 | 第79页 |
| 4.2.7 样本hCD81和hOCLN mRNA表达量检测 | 第79-83页 |
| 4.2.7.1 样本RNA逆转录cDNA | 第79-80页 |
| 4.2.7.2 实时荧光定量PCR | 第80-81页 |
| 4.2.7.3 引物溶液的配制 | 第81页 |
| 4.2.7.4 相对定量标准品的制备 | 第81-82页 |
| 4.2.7.5 反应体系配制 | 第82页 |
| 4.2.7.6 反应程序设定 | 第82-83页 |
| 4.2.8 PNL-P_(ALB)载体构建 | 第83页 |
| 4.2.9 PNL-P_(ALB)重组载体转染Huh7.5.1和PTH细胞 | 第83-84页 |
| 4.2.10 荧光素酶活性检测 | 第84页 |
| 4.2.11 统计学分析 | 第84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-89页 |
| 4.3.1 体内转染各个基因扩增曲线和溶解曲线 | 第84-86页 |
| 4.3.2 肝组织特异性表达载体特异性研究 | 第86-87页 |
| 4.3.3 P_(ALB)的扩增及PNL-P_(ALB)重组质粒的鉴定 | 第87-88页 |
| 4.3.4 P_(ALB)活性研究 | 第88-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-90页 |
| 4.5 本章小结 | 第90-92页 |
| 第五章 结论 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-102页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第102页 |
