| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 第一章 前言 | 第17-28页 |
| 1 肝素衍生物及其生物学活性 | 第18-22页 |
| 1.1 选择性化学修饰 | 第18-21页 |
| 1.1.1 脱硫酸化肝素(Desulfated Heparin) | 第18-20页 |
| 1.1.2 N-乙酰化肝素(N-Acetylation Heparin) | 第20-21页 |
| 1.1.3 羧基还原肝素(Carboxyl-Reduced Heparin,CRH) | 第21页 |
| 1.2 非选择性化学修饰 | 第21页 |
| 1.3 末端基团的修饰 | 第21-22页 |
| 2 P-选择素在肿瘤转移中的作用 | 第22-26页 |
| 2.1 P-选择素和选择素家族 | 第22-24页 |
| 2.2 P-选择素和肿瘤转移 | 第24-26页 |
| 2.2.1 活化内皮细胞和肿瘤转移 | 第25页 |
| 2.2.2 活化血小板和肿瘤转移 | 第25-26页 |
| 3 肝素及其衍生物作为P-选择素配体拮抗剂的活性研究 | 第26-27页 |
| 4 本课题拟解决的问题 | 第27-28页 |
| 第二章 肝素衍生物的制备 | 第28-32页 |
| 1 材料 | 第28页 |
| 1.1 试剂 | 第28页 |
| 1.2 仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-30页 |
| 2.1 肝素吡啶盐的制备 | 第28页 |
| 2.2 Triethylamine-N-sulfonic acid的制备 | 第28-29页 |
| 2.3 N-脱硫酸化肝素(NDeSH)的制备 | 第29页 |
| 2.4 N-和O-脱硫酸化肝素(N／ODeSH)的制备 | 第29页 |
| 2.5 N-乙酰化肝素的制备 | 第29页 |
| 2.6 2-O-脱硫酸化肝素(2DeSH)的制备 | 第29页 |
| 2.7 6-O-脱硫酸化肝素(6DeSH)的制备 | 第29-30页 |
| 2.7.1 N-脱硫酸,6-O-脱硫酸化肝素(N／6DeSH)的制备 | 第29页 |
| 2.7.2 N-重硫酸化 | 第29-30页 |
| 2.8 羧基还原肝素(CRH)的制备 | 第30页 |
| 3 结果及讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 肝素衍生物对肿瘤细胞及内皮细胞增殖的影响 | 第32-39页 |
| 1 材料 | 第32页 |
| 1.1 试剂 | 第32页 |
| 1.2 仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-33页 |
| 2.1 肝素及其衍生物对ACC-M细胞增殖的影响 | 第32-33页 |
| 2.1.1 接种ACC-M细胞 | 第32页 |
| 2.1.2 加药及孵育 | 第32页 |
| 2.1.3 显色及比色 | 第32-33页 |
| 2.2 肝素及其衍生物对ECV-304细胞增殖的影响 | 第33页 |
| 2.3 数据处理 | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| 3.1 肝素及其衍生物对ACC-M细胞增殖的影响 | 第33-35页 |
| 3.2 肝素及其衍生物对ECV-304细胞增殖的影响 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 4.1 肝素及其衍生物对ACC-M细胞增殖的影响 | 第37页 |
| 4.2 肝素及其衍生物对ECV-304细胞增殖的影响 | 第37-39页 |
| 第四章 肝素衍生物对肿瘤细胞与内皮细胞及血小板黏附的影响 | 第39-50页 |
| 1 材料 | 第39页 |
| 1.1 试剂 | 第39页 |
| 1.2 仪器 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-41页 |
| 2.1 肝素及其衍生物对ACC-M／ECV-304黏附的影响 | 第39-40页 |
| 2.1.1 接种ECV-304细胞 | 第39页 |
| 2.1.2 加药及孵育 | 第39-40页 |
| 2.1.3 接种ACC-M细胞 | 第40页 |
| 2.1.4 ACC-M细胞染色 | 第40页 |
| 2.1.5 比色 | 第40页 |
| 2.2 肝素及其衍生物对ACC-M／血小板黏附的影响 | 第40-41页 |
| 2.2.1 血小板层制备 | 第40页 |
| 2.2.2 加药及孵育 | 第40-41页 |
| 2.2.3 铺制ACC-M细胞层 | 第41页 |
| 2.2.4 MTT法计数 | 第41页 |
| 2.3 数据处理 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| 3.1 肝素及其衍生物对ACC-M／ECV-304黏附的影响 | 第41-44页 |
| 3.2 肝素及其衍生物对ACC-M／血小板黏附的影响 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 肝素及其衍生物对ACC-M／ECV-304黏附的影响 | 第47-48页 |
| 4.2 肝素及其衍生物对ACC-M／血小板黏附的影响 | 第48-50页 |
| 第五章 肝素衍生物对肿瘤细胞和P-选择素体外结合的影响 | 第50-57页 |
| 1 材料 | 第50页 |
| 1.1 试剂 | 第50页 |
| 1.2 仪器 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-51页 |
| 2.1 流式细胞术中ACC-M单细胞悬液的制备 | 第50页 |
| 2.1.1 ACC-M单细胞悬液制备 | 第50页 |
| 2.1.2 ACC-M细胞的封闭 | 第50页 |
| 2.2 肝素及其衍生物(5mg／ml)对ACC-M／P-Fc结合的影响 | 第50-51页 |
| 2.2.1 肝素及其衍生物与P-Fc的相互作用 | 第50-51页 |
| 2.2.2 ACC-M细胞的加入 | 第51页 |
| 2.2.3 FITC标记抗Human IgG的单克隆抗体的加入 | 第51页 |
| 2.2.4 流式细胞分析(Flow Cytometry Assay,FCA) | 第51页 |
| 2.3 肝素及其衍生物(1mg／ml)对ACC-M／P-Fc结合的影响 | 第51页 |
| 3 结果 | 第51-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 第六章 肝素衍生物的部分理化性质测定及化学结构分析 | 第57-70页 |
| 1 材料 | 第57页 |
| 1.1 试剂 | 第57页 |
| 1.2 仪器 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-58页 |
| 2.1 肝素及其衍生物部分理化性质测定 | 第57-58页 |
| 2.1.1 肝素及其衍生物的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第57-58页 |
| 2.1.2 硫酸—咔唑法测Hep及CRH中糖醛酸含量 | 第58页 |
| 2.2 肝素及其衍生物化学结构分析 | 第58页 |
| 2.2.1 紫外光谱扫描 | 第58页 |
| 2.2.2 红外光谱扫描 | 第58页 |
| 2.2.3 核磁共振~(13)C图谱测定 | 第58页 |
| 3 结果 | 第58-66页 |
| 3.1 肝素及其衍生物部分理化性质测定 | 第58-59页 |
| 3.1.1 肝素及其衍生物的PAGE分析 | 第59页 |
| 3.1.2 Hep及CRH中糖醛酸含量的测定 | 第59页 |
| 3.2 肝素及其衍生物化学结构分析 | 第59-66页 |
| 3.2.1 肝素及其衍生物的紫外扫描图谱 | 第59-62页 |
| 3.2.2 肝素及其衍生物的红外扫描图谱 | 第62页 |
| 3.2.3 肝素及其衍生物的核磁共振~(13)C图谱测定 | 第62-66页 |
| 4 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 肝素及其衍生物部分理化性质测定 | 第66页 |
| 4.2 肝素及其衍生物化学结构分析 | 第66-70页 |
| 4.2.1 肝素及其衍生物的紫外扫描图谱 | 第67页 |
| 4.2.2 肝素及其衍生物的红外扫描图谱 | 第67页 |
| 4.2.3 肝素及其衍生物核磁共振~(13)C图谱 | 第67-70页 |
| 总结 | 第70-72页 |
| 附图 | 第72-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文目录 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
