| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩写 | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 吡虫啉代谢研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2 植物根际促生菌(PGPR) | 第15-16页 |
| 1.3 全基因组序列分析 | 第16-18页 |
| 第二章 可转化IMI的菌株筛选和鉴定 | 第18-34页 |
| 第一节 可转化IMI的细菌菌株的筛选 | 第18-27页 |
| 1 实验材料 | 第18-19页 |
| 1.1 培养基 | 第18-19页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第19页 |
| 1.3 主要仪器设备及来源 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.1 菌株的筛选 | 第19页 |
| 2.2 静息细胞的制备和转化 | 第19-20页 |
| 2.3 HPLC和LC/MS分析 | 第20页 |
| 2.4 菌株鉴定 | 第20-23页 |
| 3 实验结果 | 第23-27页 |
| 3.1 从菌种库中筛选可转化IMI的菌株 | 第23-24页 |
| 3.2 LC/MS分析 | 第24-25页 |
| 3.3 z9菌株鉴定 | 第25-27页 |
| 4 讨论 | 第27页 |
| 第二节 转化产物的分离、提纯和结构鉴定 | 第27-34页 |
| 1 材料和方法 | 第28-29页 |
| 1.1 实验材料 | 第28页 |
| 1.2 菌种 | 第28页 |
| 1.3 菌体培养和静息细胞转化 | 第28页 |
| 1.4 HPLC分析 | 第28页 |
| 1.5 转化产物提取与纯化 | 第28页 |
| 1.6 核磁共振光谱分析 | 第28-29页 |
| 1.7 olefin IMI、5-hydroxy IMI和IMI标准工作曲线的制定 | 第29页 |
| 2 结果 | 第29-33页 |
| 2.1 菌体培养与转化 | 第29-30页 |
| 2.2 转化产物提取与纯化 | 第30-31页 |
| 2.3 核磁共振光谱分析 | 第31-32页 |
| 2.4 标准校正曲线的线性回归方程 | 第32-33页 |
| 3 讨论 | 第33-34页 |
| 第三章 P.INDICA CGMCC 6648降解特性研究及PGPR研究 | 第34-51页 |
| 第一节 P. indica CGMCC 6648降解特性 | 第34-46页 |
| 1 实验材料和方法 | 第34-36页 |
| 1.1 培养基 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第34页 |
| 1.3 主要仪器设备及来源 | 第34页 |
| 1.4 P.indica CGMCC 6648的培养 | 第34页 |
| 1.5 P.indica CGMCC 6648以不同共代谢基质静息细胞转化IMI | 第34-35页 |
| 1.6 P.indica CGMCC 6648以不同共代谢基质静息细胞转化5-hydroxy IMI | 第35页 |
| 1.7 不同通气量对P.indica CGMCC 6648静息细胞转化活性的影响 | 第35页 |
| 1.8 P.indica CGMCC 6648静息细胞转化IMI的动力学曲线 | 第35页 |
| 1.9 P.indica CGMCC 6648生长转化IMI | 第35页 |
| 1.10 P.indica CGMCC 6648静息细胞转化烟碱类杀虫剂底物特异性研究 | 第35-36页 |
| 2 结果 | 第36-45页 |
| 2.1 P.indica CGMCC 6648以不同共代谢基质静息细胞转化IMI | 第36-39页 |
| 2.2 P.indica CGMCC 6648以不同共代谢基质静息细胞转化5-hydroxy IMI | 第39-40页 |
| 2.3 不同通气量对P.indica CGMCC 6648静息细胞转化活性的影响 | 第40页 |
| 2.4 P.indica CGMCC 6648静息细胞转化IMI的动力学曲线 | 第40-41页 |
| 2.5 P.indica CGMCC 6648生长细胞转化吡虫啉 | 第41页 |
| 2.6 P.indica CGMCC 6648静息细胞转化THI、AAP和IMT | 第41-42页 |
| 2.7 P.indica CGMCC 6648静息细胞转化THI、AAP和IMT途径 | 第42-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第二节 P.indica CGMCC 6648的PGPR特性研究 | 第46-51页 |
| 1 实验材料 | 第46-47页 |
| 1.1 主要试剂 | 第46页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第46页 |
| 1.3 培养基配制: | 第46-47页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-48页 |
| 2.1 吲哚乙酸(IAA)的测定 | 第47页 |
| 2.2 胞外多糖(EPS)的测定 | 第47-48页 |
| 2.3 铁载体的测定 | 第48页 |
| 2.4 溶磷性质研究 | 第48页 |
| 2.5 产生HCN的检测 | 第48页 |
| 2.6 产生NH_3的测定 | 第48页 |
| 3 实验结果 | 第48-50页 |
| 3.1 分泌吲哚乙酸 | 第48页 |
| 3.2 分泌胞外多糖(EPS) | 第48-49页 |
| 3.3 分泌铁载体、SA和DHBA | 第49页 |
| 3.4 溶磷能力 | 第49页 |
| 3.5 产生HCN | 第49页 |
| 3.6 产NH_3 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 P.INDICA CGMCC 6648全基因组信息分析与单加氧酶的克隆表达 | 第51-69页 |
| 第一节 P.indica CGMCC 6648全基因组测序 | 第51-57页 |
| 1 主要试剂及仪器 | 第51页 |
| 1.1 主要仪器 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.1 细菌基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| 2.2 基因组测序 | 第52-53页 |
| 2.3 基因组信息组装结果进行补洞和分析 | 第53页 |
| 3 基因组测序数据及结果 | 第53-56页 |
| 3.1 P.indica CGMCC 6648基因组提取结果 | 第53-54页 |
| 3.2 基因组概况 | 第54-55页 |
| 3.3 基因组组分 | 第55-56页 |
| 3.4 转化吡虫啉的单加氧酶基因 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-57页 |
| 第二节 P. indica CGMCC 6648单加氧酶克隆表达与酶活检测 | 第57-69页 |
| 1 实验材料 | 第57-58页 |
| 1.1菌株和质粒 | 第57页 |
| 1.2 主要试剂及来源 | 第57页 |
| 1.3 培养基和主要溶液配制 | 第57-58页 |
| 1.4 主要仪器设备及其来源 | 第58页 |
| 2 实验方法 | 第58-64页 |
| 2.1 菌株培养 | 第58页 |
| 2.2 基因组DNA的提取 | 第58页 |
| 2.3 设计引物进行PCR扩增 | 第58-59页 |
| 2.4 PCR产物纯化回收 | 第59页 |
| 2.5 PCR产物装TA克隆 | 第59页 |
| 2.6 感受态细胞制备及转化 | 第59-60页 |
| 2.7 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第60-61页 |
| 2.8 测序验证 | 第61页 |
| 2.9 制备含粘性末端的DNA片段和pET载体 | 第61页 |
| 2.10 构建表达载体并转化至E.coli Rosetta | 第61-62页 |
| 2.11 目的蛋白的诱导表达 | 第62-63页 |
| 2.12 SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况 | 第63-64页 |
| 2.13 单加氧酶活性分析 | 第64页 |
| 3 实验结果 | 第64-68页 |
| 3.1 P.indica CGMCC 6648基因克隆PCR结果 | 第64页 |
| 3.2 阳性克隆的筛选结果 | 第64-65页 |
| 3.3 测序序列比对结果 | 第65页 |
| 3.4 目的片段连pET28a表达载体 | 第65-66页 |
| 3.5 目的基因诱导表达SDS-PAGE电泳结果 | 第66-67页 |
| 3.6 单加氧酶活性检测结果 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 总结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77-84页 |
| 附件一: 在读研究生期间主要科研情况 | 第77-78页 |
| 附件二: IMI及产物的相关NMR图谱 | 第78-81页 |
| 附件三: P. indica CGMCC 6648菌株16SrDNA序列 | 第81-82页 |
| 附件四: P. indica CGMCC 6648菌株单加氧酶基因核酸序列 | 第82-84页 |
| 附件五: P.indica CGMCC 6648菌株单加氧酶氨基酸序列 | 第84页 |
