| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 OCIA研究进展 | 第14-21页 |
| 引言 | 第14页 |
| 1 OCIA 的发现及命名 | 第14页 |
| 2 OCIA 的特点 | 第14-16页 |
| 3 OCIA 的功能 | 第16-20页 |
| ·OCIA 在造血系统中的作用 | 第16-17页 |
| ·OCIA 在血细胞迁移的作用 | 第16-17页 |
| ·OCIA 作为血管形成初期的标志物 | 第17页 |
| ·OCIA 与胚胎干细胞的自我更新 | 第17-18页 |
| ·OCIA 与肿瘤的发生 | 第18-20页 |
| ·OCIA 在转移性肿瘤中的作用特点 | 第19页 |
| ·OCIA 在肿瘤中的作用途径 | 第19页 |
| ·OCIA 与肿瘤治疗 | 第19-20页 |
| 4 展望 | 第20-21页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第21-23页 |
| 1 研究意义和目的 | 第21页 |
| 2 实验内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-34页 |
| 1 序列与生物信息学工具 | 第23页 |
| ·序列 | 第23页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-32页 |
| ·BmOCIAD2 基因的序列 | 第24-26页 |
| ·BmOCIAD2 二级结构的预测 | 第26-27页 |
| ·BmOCIAD2 的疏水性 | 第27页 |
| ·BmOCIAD2 的跨膜区预测分析 | 第27页 |
| ·BmOCIAD2 的信号肽分析 | 第27-28页 |
| ·BmOCIAD2 在细胞中定位的分析 | 第28-29页 |
| ·BmOCIAD2 的功能位点预测分析 | 第29页 |
| ·BmOCIAD2 的编码蛋白功能预测 | 第29-30页 |
| ·BmOCIAD2 氨基酸序列的同源性分析 | 第30-31页 |
| ·进化树分析 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 BmOCIAD2 基因的克隆及原核表达 | 第34-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第34-37页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·主要试剂的配制 | 第34-37页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA 用试剂 | 第35-36页 |
| ·核酸电泳所用试剂 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第36-37页 |
| ·其他试剂 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-43页 |
| ·BmOCIAD2 基因重组质粒的构建 | 第37-41页 |
| ·家蚕蛹期总RNA 的提取 | 第38页 |
| ·逆转录合成cDNA | 第38页 |
| ·PCR 获得完整的ORF 序列 | 第38-39页 |
| ·PCR 产物与表达载体pET-28a(+)的双酶切 | 第39页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第39-40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| ·E.coli TG1、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·连接产物的转化 | 第40页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第40-41页 |
| ·BmOCIAD2 基因序列的测定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第42页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| ·家蚕蛹总RNA 琼脂糖电泳检测 | 第43页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第43-44页 |
| ·重组克隆的鉴定 | 第44页 |
| ·序列测定 | 第44页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第47-61页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-50页 |
| ·材料与设备 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·主要试剂的配制 | 第47-50页 |
| ·处理重组蛋白用试剂 | 第47-48页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第48页 |
| ·反相FPLC 纯化用试剂 | 第48页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第48-49页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第49页 |
| ·ELISA 用试剂 | 第49页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第49-50页 |
| ·Western blot 用试剂 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-55页 |
| ·重组蛋白的亲和层析 | 第50-51页 |
| ·酶切重组蛋白中的His 标签 | 第51页 |
| ·重组蛋白的FPLC 纯化 | 第51页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第51-52页 |
| ·Bradford 法蛋白定量 | 第52页 |
| ·抗原制备 | 第52-53页 |
| ·免疫动物 | 第53页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第53页 |
| ·抗体的效价测定(ELISA 间接法) | 第53-54页 |
| ·抗体的纯化 | 第54页 |
| ·Western blot 检测抗体特异性 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·酶切重组蛋白中的His 标签 | 第55-56页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第56页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第56-57页 |
| ·纯化蛋白定量 | 第57页 |
| ·抗体的效价测定 | 第57页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第57-58页 |
| ·Western blot 检测 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-61页 |
| 第六章 Bm OCIAD2 的表达分析 | 第61-72页 |
| 1 材料与试剂 | 第61-62页 |
| ·材料与仪器 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·主要试剂的配制 | 第61-62页 |
| ·蛋白提取裂解液 | 第61-62页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第62页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第62页 |
| ·Western blot 用试剂 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-65页 |
| ·总RNA 的提取 | 第62-63页 |
| ·反转录反应 | 第63页 |
| ·荧光定量PCR | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR 反应体系 | 第64页 |
| ·荧光定量PCR 反应程序 | 第64页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第64-65页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第65页 |
| ·Western blot 检测BmOCIAD2 在家蚕各发育时期的分布 | 第65页 |
| ·Western blot 检测BmOCIAD2 在家蚕五龄幼虫各组织的分布 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| ·家蚕发育过程中BmOCIAD2 mRNA 量的变化 | 第65-67页 |
| ·家蚕发育过程中BmOCIAD2 表达量的变化 | 第67-68页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmOCIAD2 mRNA 量的分析 | 第68-70页 |
| ·五龄幼虫各组织中BmOCIAD2 表达量分析 | 第70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第七章 亚细胞定位 | 第72-75页 |
| 1 材料与试剂 | 第72-73页 |
| ·材料与仪器 | 第72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·试剂配制 | 第72-73页 |
| 2 方法 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
