| 摘要 | 第6-10页 |
| ABSTRACT | 第10-14页 |
| 缩略词 | 第15-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-41页 |
| 1.1 里氏木霉木质纤维素酶类型特征 | 第17-19页 |
| 1.2 环境碳源对里氏木霉纤维素酶基因表达的影响 | 第19-21页 |
| 1.2.1 纤维素酶及半纤维素酶表达的抑制型碳源 | 第19页 |
| 1.2.2 纤维素及半纤维素酶表达诱导型碳源及其诱导模式 | 第19-21页 |
| 1.2.2.1 可溶性诱导碳源及诱导模式 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 不溶性诱导碳源及诱导模式 | 第20-21页 |
| 1.3 里氏木霉纤维素酶基因转录因子及调控机制 | 第21-34页 |
| 1.3.1 真菌相关生物转录调控机制 | 第21-28页 |
| 1.3.1.1 真核生物基因转录基本过程 | 第21-22页 |
| 1.3.1.2 真菌转录调控因子的分类 | 第22-25页 |
| 1.3.1.3 锌指双核结构域转录因子结构特征 | 第25-26页 |
| 1.3.1.4 锌指双核结构转录因子作用模式 | 第26-28页 |
| 1.3.2 里氏木霉纤维素酶基因转录相关因子的作用模式 | 第28-34页 |
| 1.3.2.1 里氏木霉纤维素酶转录激活因子XYR1的作用机制 | 第29-32页 |
| 1.3.2.2 里氏木霉纤维素酶转录抑制因子Cre1作用机制 | 第32-33页 |
| 1.3.2.3 纤维素酶转录因子Ace1、Ace2与Ace3研究进展 | 第33-34页 |
| 1.3.2.4 葡萄糖苷酶转录调控因子Bg1R | 第34页 |
| 1.4 基于不同启动子的丝状真菌表达系统 | 第34-39页 |
| 1.4.1 组成型表达启动子 | 第35-36页 |
| 1.4.1.1 依赖碳源的组成型表达启动子 | 第35-36页 |
| 1.4.1.2 不依赖碳源的组成型表达启动子 | 第36页 |
| 1.4.2 可调控型表达启动子 | 第36-39页 |
| 1.4.2.1 受纤维素及半纤维素诱导表达的启动子 | 第36-37页 |
| 1.4.2.2 奎宁酸诱导调控表达启动子 | 第37页 |
| 1.4.2.3 光诱导调控表达启动子 | 第37-38页 |
| 1.4.2.4 铜离子调控表达启动子 | 第38页 |
| 1.4.2.5 tet on/off调控表达启动子 | 第38-39页 |
| 1.4.2.6 甲硫氨酸抑制调控表达启动子 | 第39页 |
| 1.5 论文立题依据及研究内容 | 第39-41页 |
| 第二章 里氏木霉纤维素酶基因转录激活因子Xyr1结构及功能分析 | 第41-77页 |
| 2.1 材料和方法 | 第42-56页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第42-44页 |
| 2.1.2 引物 | 第44-45页 |
| 2.1.3 培养基及培养条件 | 第45-46页 |
| 2.1.4 生物信息学分析方法 | 第46-47页 |
| 2.1.5 实验具体操作方法 | 第47-56页 |
| 2.2 实验结果及讨论 | 第56-75页 |
| 2.2.1 里氏木霉Xyr1的序列及结构分析 | 第56-57页 |
| 2.2.2 Xyr1DNA结合结构域的功能分析 | 第57-65页 |
| 2.2.2.1 Xyr1对cbh1不同区域的结合能力分析 | 第57-59页 |
| 2.2.2.2 Xyr1结合结构域可能的磷酸化位点分析 | 第59-61页 |
| 2.2.2.3 Xyr1结合结构域纤维素酶基因调节功能研究分析 | 第61-65页 |
| 2.2.3 Xyr1中间同源区及激活结构域功能分析 | 第65-75页 |
| 2.2.3.1 Xyr1中间同源区体内缺失突变体分析 | 第65-66页 |
| 2.2.3.2 Xyr1 C端激活结构域分析 | 第66-68页 |
| 2.2.3.3 Xyr1 C端激活结构域与中间同源区之间相互作用分析 | 第68页 |
| 2.2.3.4 Xyr1激活结构域缺失体内稳定性分析 | 第68-70页 |
| 2.2.3.5 Xyr1激活结构域在纤维素酶基因激活中发挥的作用 | 第70-75页 |
| 2.3 本章小结 | 第75-77页 |
| 第三章 基于铜离子透性酶基因启动子可调控表达体系的建立及应用 | 第77-97页 |
| 3.1 材料和方法 | 第78-81页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第78-79页 |
| 3.1.2 引物 | 第79-80页 |
| 3.1.3 培养基及培养条件 | 第80页 |
| 3.1.4 实验具体操作方法 | 第80-81页 |
| 3.2 结果分析与讨论 | 第81-95页 |
| 3.2.1 里氏木霉中铜离子透性酶基因的鉴定 | 第81-86页 |
| 3.2.1.1 里氏木霉铜离子透性酶生物信息学分析 | 第81-83页 |
| 3.2.1.2 不同浓度铜离子对生长影响 | 第83-84页 |
| 3.2.1.3 里氏木霉tcul体内转录性质分析 | 第84-86页 |
| 3.2.2 基于里氏木霉tcu1启动子表达体系的建立 | 第86-95页 |
| 3.2.2.1 Ptcu1-gfp荧光强度受铜离子浓度抑制 | 第86-87页 |
| 3.2.2.2 Ptcu1启动子表达纤维二糖水解酶CBH1的相关性质分析 | 第87-89页 |
| 3.2.2.3 Ptcu1启动子表达内切酶EG1的相关性质分析 | 第89-92页 |
| 3.2.2.4 Ptcu1启动子置换以模拟目标基因的过表达及缺失 | 第92-95页 |
| 3.3 本章小结 | 第95-97页 |
| 第四章 Xyr1过表达导致纤维素酶基因非诱导依赖表达及其机制初探 | 第97-125页 |
| 4.1 材料和方法 | 第98-102页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第98-99页 |
| 4.1.2 所用引物 | 第99-100页 |
| 4.1.3 培养基及培养条件 | 第100页 |
| 4.1.4 主要实验操作技术 | 第100-102页 |
| 4.2 实验结果及讨论 | 第102-123页 |
| 4.2.1 里氏木霉Xyr1在细胞内定位研究分析 | 第102-104页 |
| 4.2.1.1 构建组成型表达N端GFP修饰Xyr1菌株 | 第102-103页 |
| 4.2.1.2 Xyr1在非诱导条件与诱导状态下均在细胞核内聚集 | 第103-104页 |
| 4.2.2 Xyr1过表达导致里氏木霉纤维素酶基因非诱导依赖表达 | 第104-111页 |
| 4.2.2.1 Ptcul-xyr1菌株的构建 | 第105-106页 |
| 4.2.2.2 Ptcul-xyr1Δxyrl恢复在Avicel上纤维素酶诱导能力 | 第106-107页 |
| 4.2.2.3 Ptcul-xyr1Δxyrl恢复并提高在乳糖上纤维素酶诱导表达能力 | 第107-108页 |
| 4.2.2.4 Ptcul-xyr1完全解除了在葡萄糖及甘油培养下碳代谢阻遏效应 | 第108-109页 |
| 4.2.2.5 Ptcul-xyr1解除碳代谢阻遏效应能力与Xyr1的表达量正相关 | 第109-111页 |
| 4.2.3 Xyr1过表达影响里氏木霉的菌丝生长以及压力响应 | 第111-112页 |
| 4.2.4 Xyr1过表达对cbh1启动子状态影响 | 第112-115页 |
| 4.2.5 Cre1通过调控xyr1转录调控纤维素酶基因转录 | 第115-123页 |
| 4.2.5.1 酵母单杂交验证Cre1与xyr1启动子相互作用 | 第116-117页 |
| 4.2.5.2 体内Cre1与xyr1 promter及cbh1 promoter相互作用分析 | 第117-118页 |
| 4.2.5.3 Cre1与Xyr1在纤维素酶基因启动子上的作用分析 | 第118-123页 |
| 4.3 本章小结 | 第123-125页 |
| 第五章 与Xyr1相关因子在里氏木霉纤维素酶基因转录调控的作用 | 第125-137页 |
| 5.1 材料和方法 | 第125-128页 |
| 5.1.1 菌株及质粒 | 第125-126页 |
| 5.1.2 引物 | 第126-127页 |
| 5.1.3 培养基及培养条件 | 第127页 |
| 5.1.4 实验具体操作方法 | 第127-128页 |
| 5.2 实验结果及讨论 | 第128-135页 |
| 5.2.1 与Xyr1相互作用蛋白Tr30478相关性质分析 | 第128-134页 |
| 5.2.1.1 酵母双杂交筛选与Xyr1AD区域相互作用蛋白 | 第129-130页 |
| 5.2.1.2 Tr30478结构预测 | 第130-131页 |
| 5.2.1.3 Tr30478体内定位及作用研究 | 第131-134页 |
| 5.2.2 与xyr1启动子结合蛋白的酵母单杂交的筛选 | 第134-135页 |
| 5.3 本章小结 | 第135-137页 |
| 全文总结与展望 | 第137-140页 |
| 参考文献 | 第140-148页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第148-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 附录 | 第150-171页 |
| 附件 | 第171页 |
