| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-24页 |
| 第一章 转录组技术的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1 基因芯片技术 | 第12-13页 |
| 1.1.1 基本原理 | 第12-13页 |
| 1.1.2 基本特点 | 第13页 |
| 1.2 高通量转录组测序 | 第13-14页 |
| 1.2.1 基本原理 | 第13-14页 |
| 1.2.1.1 Roche/454测序 | 第13页 |
| 1.2.1.2 Illumina/Solexa测序 | 第13-14页 |
| 1.2.1.3 ABI/SOLiD测序 | 第14页 |
| 1.2.2 基本特点 | 第14页 |
| 1.3 单细胞转录组测序 | 第14-15页 |
| 1.3.1 基本原理 | 第14页 |
| 1.3.2 基本步骤 | 第14-15页 |
| 1.3.3 基本特点 | 第15页 |
| 1.4 转录组测序技术在生物研究中的应用 | 第15-17页 |
| 1.4.1 发现新的基因酶切位点 | 第15-16页 |
| 1.4.2 在肿瘤研究中的应用 | 第16页 |
| 1.4.3 在胚胎发育研究中的应用 | 第16-17页 |
| 第二章 颗粒细胞对卵母细胞发育的作用 | 第17-24页 |
| 2.1 卵母细胞成熟 | 第17-18页 |
| 2.2 体外成熟 | 第18-20页 |
| 2.3 颗粒细胞在卵母细胞发育中的作用 | 第20-23页 |
| 2.3.1 对卵母细胞成熟的作用 | 第20-22页 |
| 2.3.1.1 保持卵母细胞第一次减数分裂双线期的阻滞 | 第20-21页 |
| 2.3.1.2 诱导卵母细胞第一次减数分裂的重启 | 第21页 |
| 2.3.1.3 对卵母细胞胞质成熟的作用 | 第21-22页 |
| 2.3.1.4 防止卵母细胞氧化损伤 | 第22页 |
| 2.3.2 对受精的作用 | 第22-23页 |
| 2.3.2.1 吸引和捕获并选择精子 | 第22页 |
| 2.3.2.2 有助于精子获能、顶体反应和穿入卵母细胞 | 第22页 |
| 2.3.2.3 防止透明带硬化 | 第22-23页 |
| 2.3.3 对胚胎发育的作用 | 第23页 |
| 2.4 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 试验研究 | 第24-50页 |
| 第三章 单细胞测序分析颗粒细胞的基因表达谱 | 第24-35页 |
| 3.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 实验样本 | 第24页 |
| 3.1.2 主要仪器及设备 | 第24页 |
| 3.1.3 主要试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 3.2 试验方法 | 第25-29页 |
| 3.2.1 卵母细胞的收集 | 第25页 |
| 3.2.2 卵母细胞的体外成熟 | 第25页 |
| 3.2.3 GⅤ期、MⅠ期及MⅡ期的时间确定 | 第25-26页 |
| 3.2.4 颗粒细胞的转录组测序 | 第26-28页 |
| 3.2.4.1 颗粒细胞的收集 | 第26页 |
| 3.2.4.2 单细胞转录组扩增 | 第26页 |
| 3.2.4.3 文库构建 | 第26-27页 |
| 3.2.4.4 转录组测序数据及生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.2.5 转录组测序数据的RT-qPCR验证 | 第28-29页 |
| 3.2.5.1 微量RNA提取及cDNA合成 | 第28-29页 |
| 3.2.5.2 RT-qPCR验证 | 第29页 |
| 3.2.5.3 数据分析 | 第29页 |
| 3.3 结果与分析 | 第29-32页 |
| 3.3.1 GⅤ期、MⅠ期及MⅡ期的时间确定 | 第29-31页 |
| 3.3.1.1 染色体形态变化 | 第29-30页 |
| 3.3.1.2 时间确定 | 第30-31页 |
| 3.3.2 差异表达基因分析 | 第31页 |
| 3.3.3 转录本统计分析 | 第31页 |
| 3.3.4 RT-qPCR验证 | 第31-32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-34页 |
| 3.4.1 牦牛卵母细胞体外成熟进程分析 | 第32-33页 |
| 3.4.2 转录组数据库构建质量评估 | 第33-34页 |
| 3.4.3 转录组测序分析 | 第34页 |
| 3.5 小结 | 第34-35页 |
| 第四章 CCND1和CCND2与卵母细胞发育潜能的关联性 | 第35-50页 |
| 4.1 试验材料 | 第35-36页 |
| 4.1.1 实验样本 | 第35页 |
| 4.1.2 主要试剂和耗材 | 第35-36页 |
| 4.2 试验方法 | 第36-43页 |
| 4.2.1 免疫组化定位检测 | 第36-38页 |
| 4.2.2 荧光免疫定性检测 | 第38页 |
| 4.2.3 RT-qPCR定量检测 | 第38-40页 |
| 4.2.3.1 颗粒细胞的收集 | 第38页 |
| 4.2.3.2 RNA提取 | 第38-39页 |
| 4.2.3.3 cDNA合成 | 第39页 |
| 4.2.3.4 RT-qPCR | 第39-40页 |
| 4.2.4 免疫印迹定量检测 | 第40-42页 |
| 4.2.4.1 总蛋白提取 | 第40页 |
| 4.2.4.2 蛋白浓度测定（BCA法） | 第40-41页 |
| 4.2.4.3 免疫印迹（Western Blot） | 第41-42页 |
| 4.2.5 CCND1和CCND2与卵母细胞成熟率和发育能力的关联性 | 第42-43页 |
| 4.2.5.1 颗粒细胞的收集 | 第42页 |
| 4.2.5.2 单枚卵母细胞体外成熟培养 | 第42页 |
| 4.2.5.3 体外受精与胚胎培养 | 第42-43页 |
| 4.2.5.4 颗粒细胞微量RNA提取和cDNA合成 | 第43页 |
| 4.2.5.5 RT-qPCR定量分析 | 第43页 |
| 4.2.5.6 统计分析 | 第43页 |
| 4.3 结果和分析 | 第43-47页 |
| 4.3.1 CCND1和CCND2的定位分析 | 第43页 |
| 4.3.2 CCND1和CCND2的定性分析 | 第43-44页 |
| 4.3.3 CCND1和CCND2的mRNA表达水平 | 第44-45页 |
| 4.3.4 CCND1和CCND2蛋白定量分析 | 第45页 |
| 4.3.5 CCND1和CCND2与卵母细胞发育潜能的关联性研究 | 第45-47页 |
| 4.3.5.1 与卵母细胞成熟率的关联性 | 第45-46页 |
| 4.3.5.2 与卵母细胞树精后囊胚率的关联性 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 附录：硕士期间发表的文章 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
