| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| 1.1 哺乳动物成熟精子调控 | 第9-13页 |
| 1.1.1 精子受精过程 | 第9-10页 |
| 1.1.2 Ca~(2+)信号对精子功能的核心调节作用 | 第10-12页 |
| 1.1.3 CatSper介导的精子Ca~(2+)信号调控 | 第12-13页 |
| 1.2 生理因子胞外ATP | 第13-16页 |
| 1.2.1 胞外ATP的来源与作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 介导胞外ATP效应的P2受体 | 第14-16页 |
| 1.3 胞外ATP作用哺乳动物成熟精子的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.3.1 胞外ATP对模型动物成熟精子的作用 | 第16页 |
| 1.3.2 胞外ATP对人成熟精子的作用 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 实验相关溶液配方 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 2.2.1 精液质量检测 | 第22页 |
| 2.2.2 Percoll密度梯度离心纯化精子 | 第22页 |
| 2.2.3 精子[Ca~(2+)]_i浓度检测 | 第22-23页 |
| 2.2.4 RT-PCR检测P2受体mRNA表达 | 第23-25页 |
| 2.2.5 Western-blot检测P2受体蛋白表达 | 第25-27页 |
| 2.2.6 精子膜片钳记录 | 第27页 |
| 2.2.7 间接免疫荧光 | 第27-28页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-47页 |
| 3.1 ATPe通过诱导外Ca~(2+)内流增加人精子[Ca~(2+)]_i | 第29-31页 |
| 3.1.1 ATPe浓度依赖的增加人精子[Ca~(2+)]_i | 第29-30页 |
| 3.1.2 ATPe增加的[Ca~(2+)]_i来自外Ca~(2+)内流 | 第30-31页 |
| 3.2 P2受体参与ATPe诱导的人精子[Ca~(2+)]_i | 第31-33页 |
| 3.2.1 P2受体抑制剂抑制ATPe增加的[Ca~(2+)]_i | 第31页 |
| 3.2.2 P2受体在人精子中的表达 | 第31-33页 |
| 3.3 P2X不参与ATPe诱导的人精子[Ca~(2+)]_i | 第33-35页 |
| 3.3.1 人精子中未记录到ATPe激活的P2X2电流 | 第33-34页 |
| 3.3.2 P2X抗体不影响ATPe增加的 [Ca~(2+)]_i | 第34-35页 |
| 3.4 ATPe增加人精子[Ca~(2+)]_i通过作用于P2Y1 | 第35-36页 |
| 3.5 CatSper介导人精子中ATPe诱导的Ca~(2+)内流 | 第36-38页 |
| 3.5.1 CatSper阻断剂抑制ATPe增加的[Ca~(2+)]_i | 第36-37页 |
| 3.5.2 ATPe增加CatSper电流 | 第37-38页 |
| 3.6 P2Y1介导ATPe对人精子CatSper的激活 | 第38-44页 |
| 3.6.1 P2Y1抗体抑制ATPe增加的CatSper电流 | 第38-39页 |
| 3.6.2 P2受体抑制剂和P2Y1抗体自身不抑制CatSper | 第39-41页 |
| 3.6.3 胞内GTP加强ATPe对CatSper电流的增加效应 | 第41-43页 |
| 3.6.4 P2Y1与CatSper在人精子中具有相似定位 | 第43-44页 |
| 3.7 P2Y1的表达和功能与人精子运动相关 | 第44-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 4.1 哺乳动物成熟精子中介导ATPe效应的P2受体 | 第47-48页 |
| 4.2 人精子CatSper通道的调控机制 | 第48-49页 |
| 4.3 P2Y1在人精子中的功能探讨 | 第49-51页 |
| 5 结论与展望 | 第51-52页 |
| 5.1 结论 | 第51页 |
| 5.2 进一步工作的方向 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第59页 |
