| 摘要 | 第11-16页 |
| Abstract | 第16-21页 |
| 缩略语表 | 第22-25页 |
| 1 前言 | 第25-35页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第25页 |
| 1.2 文献综述 | 第25-34页 |
| 1.2.1 奶牛乳腺炎病因及病理变化特征 | 第25-26页 |
| 1.2.2 中药防治奶牛乳腺炎作用机理研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.3 中药在奶牛乳腺炎防治应用的研究进展 | 第28-30页 |
| 1.2.4 靛玉红的来源及重要衍生物 | 第30页 |
| 1.2.5 靛玉红作用机理及临床应用 | 第30-34页 |
| 1.3 小结与展望 | 第34-35页 |
| 2 研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 3 MMECs提取鉴定及药物浓度确定 | 第36-49页 |
| 3.1 试验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第36页 |
| 3.1.2 试剂及耗材 | 第36页 |
| 3.1.3 试验仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.4 工作液配置 | 第37页 |
| 3.2 试验方法 | 第37-43页 |
| 3.2.1 MMECs提取 | 第37-38页 |
| 3.2.2 MMECs鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 LPS诱炎浓度确定 | 第39-40页 |
| 3.2.4 靛玉红对MMECs活性影响 | 第40页 |
| 3.2.5 靛玉红抑炎浓度确定 | 第40-41页 |
| 3.2.6 qRT-PCR试验 | 第41-43页 |
| 3.2.7 qRT-PCR引物 | 第43页 |
| 3.2.8 数据分析 | 第43页 |
| 3.3 试验结果与分析 | 第43-48页 |
| 3.3.1 MMECs形态学鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.2 MMECs免疫荧光鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 LPS最佳促炎浓度确定 | 第45-46页 |
| 3.3.4 靛玉红对MMECs活性影响 | 第46-47页 |
| 3.3.5 靛玉红抑炎浓度确定 | 第47-48页 |
| 3.4 试验小结 | 第48-49页 |
| 4 靛玉红抑制LPS诱导MMECs炎症作用及机制研究 | 第49-63页 |
| 4.1 试验材料 | 第49-50页 |
| 4.1.1 试验动物 | 第49页 |
| 4.1.2 试剂及耗材 | 第49-50页 |
| 4.2 试验方法 | 第50-55页 |
| 4.2.1 MMECs提取及鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR检测 | 第51页 |
| 4.2.3 ELISA检测相关炎性因子 | 第51-52页 |
| 4.2.4 MMECs总蛋白的提取 | 第52-53页 |
| 4.2.5 BCA测定蛋白浓度 | 第53页 |
| 4.2.6 相关蛋白western blot检测 | 第53-55页 |
| 4.2.7 数据分析 | 第55页 |
| 4.3 试验结果与分析 | 第55-62页 |
| 4.3.1 靛玉红抑制促炎因子的表达 | 第55-56页 |
| 4.3.2 靛玉红抑制COX-2 的表达 | 第56-57页 |
| 4.3.3 靛玉红抑制TLR4的表达 | 第57-58页 |
| 4.3.4 靛玉红抑制NF-κB的激活 | 第58-60页 |
| 4.3.5 靛玉红抑制MAPKs的活化 | 第60-62页 |
| 4.4 试验小结 | 第62-63页 |
| 5 靛玉红治疗小鼠乳腺炎作用及机制研究 | 第63-82页 |
| 5.1 试验材料 | 第63页 |
| 5.1.1 试验动物 | 第63页 |
| 5.1.2 试剂及耗材 | 第63页 |
| 5.1.3 工作液配制 | 第63页 |
| 5.2 试验方法 | 第63-70页 |
| 5.2.1 小鼠乳腺炎模型的建立 | 第63-64页 |
| 5.2.2 小鼠乳腺炎模型的评价 | 第64页 |
| 5.2.3 小鼠乳腺炎治疗试验设计 | 第64-65页 |
| 5.2.4 病理切片制作及观察 | 第65-68页 |
| 5.2.5 组织匀浆上清的制备 | 第68页 |
| 5.2.6 试验小鼠血清的处理 | 第68页 |
| 5.2.7 试验小鼠MPO检测 | 第68-69页 |
| 5.2.8 ELISA检测促炎因子 | 第69页 |
| 5.2.9 信号通路免疫荧光检测 | 第69-70页 |
| 5.2.10 乳腺组织总蛋白的提取 | 第70页 |
| 5.2.11 Western blot检测 | 第70页 |
| 5.2.12 数据分析 | 第70页 |
| 5.3 试验结果与分析 | 第70-81页 |
| 5.3.1 靛玉红治疗小鼠乳腺炎效果观察及评价 | 第70-73页 |
| 5.3.2 靛玉红抑制乳腺炎小鼠MPO活性 | 第73页 |
| 5.3.3 靛玉红抑制乳腺炎小鼠促炎因子的表达 | 第73-74页 |
| 5.3.4 靛玉红抑制乳腺炎小鼠乳腺组织中TLR4的表达 | 第74-76页 |
| 5.3.5 靛玉红抑制乳腺炎小鼠乳腺组织NF-κB的活化 | 第76-78页 |
| 5.3.6 靛玉红抑制乳腺炎小鼠乳腺组织MAPKs的激活 | 第78-81页 |
| 5.4 试验小结 | 第81-82页 |
| 6 靛玉红对小鼠乳腺炎保护性作用及机制研究 | 第82-95页 |
| 6.1 试验材料 | 第82页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第82页 |
| 6.1.2 试剂及耗材 | 第82页 |
| 6.2 试验方法 | 第82-85页 |
| 6.2.1 小鼠乳腺炎模型的建立 | 第82页 |
| 6.2.2 试验分组及试验设计 | 第82-83页 |
| 6.2.3 乳腺病理切片制作及观察 | 第83页 |
| 6.2.4 乳腺组织上清及血清制备 | 第83页 |
| 6.2.5 MPO和促炎因子检测 | 第83页 |
| 6.2.6 MMECs的提取及鉴定 | 第83页 |
| 6.2.7 靛玉红对MMECs保护性试验 | 第83-85页 |
| 6.2.8 数据分析 | 第85页 |
| 6.3 试验结果与分析 | 第85-94页 |
| 6.3.1 靛玉红对乳腺炎小鼠乳腺组织保护作用 | 第85-87页 |
| 6.3.2 靛玉红抑制乳腺炎小鼠MPO的表达 | 第87-88页 |
| 6.3.3 靛玉红抑制乳腺炎小鼠促炎因子的表达 | 第88-89页 |
| 6.3.4 靛玉红抑制MMECs促炎因子的表达 | 第89页 |
| 6.3.5 靛玉红抑制MMECs中COX-2 的表达 | 第89-90页 |
| 6.3.6 靛玉红抑制MMECs中TLR4的表达 | 第90-91页 |
| 6.3.7 靛玉红抑制MMECs中NF-κB的激活 | 第91-93页 |
| 6.3.8 靛玉红抑制MMECs中MAPKs的活化 | 第93-94页 |
| 6.4 试验小结 | 第94-95页 |
| 7 靛玉红对脂多糖诱导MMECs炎症发挥作用时效性评价 | 第95-102页 |
| 7.1 试验材料 | 第95页 |
| 7.1.1 试验动物 | 第95页 |
| 7.1.2 试验耗材 | 第95页 |
| 7.2 试验方法 | 第95-96页 |
| 7.2.1 MMECs的提取及鉴定 | 第95页 |
| 7.2.2 qRT-PCR检测 | 第95页 |
| 7.2.3 Western blot评价 | 第95-96页 |
| 7.2.4 数据分析 | 第96页 |
| 7.3 试验结果与分析 | 第96-101页 |
| 7.3.1 靛玉红时间相关性抑制促炎因子表达 | 第96-97页 |
| 7.3.2 靛玉红时间相关性抑制COX-2 的表达 | 第97-98页 |
| 7.3.3 靛玉红时间相关性抑制TLR4的表达 | 第98-99页 |
| 7.3.4 靛玉红时间相关性抑制NF-κB的活化 | 第99-100页 |
| 7.3.5 靛玉红时间相关性抑制MAPKs的活化 | 第100-101页 |
| 7.4 试验小结 | 第101-102页 |
| 8 靛玉红对脂多糖诱导MMECs凋亡的研究 | 第102-107页 |
| 8.1 试验材料 | 第102页 |
| 8.1.1 试验动物 | 第102页 |
| 8.1.2 试验材料 | 第102页 |
| 8.1.3 试剂制备 | 第102页 |
| 8.2 试验方法 | 第102-104页 |
| 8.2.1 MMECs的提取及鉴定 | 第102页 |
| 8.2.2 MMECs凋亡的形态学试验 | 第102-103页 |
| 8.2.3 凋亡相关基因表达水平检测 | 第103页 |
| 8.2.4 凋亡基因qRT-PCR引物序列 | 第103页 |
| 8.2.5 凋亡基因western blot分析 | 第103-104页 |
| 8.3 试验结果与分析 | 第104-106页 |
| 8.3.1 靛玉红可改善LPS诱导MMECs凋亡形态 | 第104页 |
| 8.3.2 靛玉红对Bcl-2 家族关键成员活性的影响 | 第104-105页 |
| 8.3.3 靛玉红对Caspase家族关键成员活性的影响 | 第105-106页 |
| 8.4 试验小结 | 第106-107页 |
| 9 讨论与结论 | 第107-117页 |
| 9.1 讨论 | 第107-115页 |
| 9.1.1 原代MMECs的分离 | 第107页 |
| 9.1.2 原代MMECs的纯化 | 第107-108页 |
| 9.1.3 原代MMECs的鉴定 | 第108页 |
| 9.1.4 原代MMECs的培养 | 第108-109页 |
| 9.1.5 LPS诱导炎症模型的建立 | 第109页 |
| 9.1.6 靛玉红最佳抑炎浓度的确定 | 第109-110页 |
| 9.1.7 靛玉红抑制LPS诱导炎性因子表达 | 第110页 |
| 9.1.8 靛玉红抑制LPS诱导COX-2 的表达 | 第110-111页 |
| 9.1.9 靛玉红抑制LPS诱导TLR4的表达 | 第111-112页 |
| 9.1.10 靛玉红抑制LPS诱导NF-κB的激活 | 第112-113页 |
| 9.1.11 靛玉红抑制LPS诱导MAPKs的活化 | 第113页 |
| 9.1.12 靛玉红抑制LPS诱导MMECs凋亡研究 | 第113-115页 |
| 9.2 结论 | 第115-117页 |
| 10 创新与不足 | 第117-118页 |
| 10.1 创新之处 | 第117页 |
| 10.2 研究不足 | 第117页 |
| 10.3 进一步研究的建议/设想 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-136页 |
| 附录 | 第136-139页 |
| 个人简介 | 第136-137页 |
| 在读期间发表的论文 | 第137-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
