| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-28页 |
| 1.1 INSM1的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 INSM1在机体中的表达模式 | 第12-14页 |
| 1.1.1.1 INSM1与神经内分泌系统 | 第13页 |
| 1.1.1.2 INSM1与肿瘤 | 第13-14页 |
| 1.1.2 INSM1蛋白的组织结构 | 第14-16页 |
| 1.1.3 INSM1的DNA结合和转录抑制功能 | 第16页 |
| 1.2 锌指蛋白 | 第16-22页 |
| 1.2.1 C2H2型锌指的结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 C2H2型锌指蛋白的分类 | 第18页 |
| 1.2.3 C2H2型锌指蛋白的功能 | 第18-22页 |
| 1.2.3.1 C2H2型锌指蛋白与DNA的相互作用 | 第18-21页 |
| 1.2.3.2 C2H2型锌指蛋白与RNA的相互作用 | 第21页 |
| 1.2.3.3 C2H2型锌指蛋白与蛋白质的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.3 核磁共振技术 | 第22-27页 |
| 1.3.1 核磁共振基本原理 | 第22-23页 |
| 1.3.2 核磁共振主要检测参数 | 第23-24页 |
| 1.3.3 核磁共振解析蛋白质的结构 | 第24-26页 |
| 1.3.4 核磁共振研究蛋白质的动力学及功能 | 第26-27页 |
| 1.4 课题设计的思路、目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 INSM1-ZF(4-5)蛋白的表达、纯化及表征 | 第28-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第28-29页 |
| 2.1.2 试剂和仪器 | 第29-30页 |
| 2.2 ZF(4-5)蛋白的制备 | 第30-36页 |
| 2.2.1 重组质粒pET-32m-ZF(4-5)的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.1.1 PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.1.2 酶切反应 | 第31页 |
| 2.2.1.3 酶连反应 | 第31-32页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌的热激转化 | 第32页 |
| 2.2.1.5 重组质粒的提取和鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.2 未标记ZF(4-5)蛋白的表达 | 第33页 |
| 2.2.3 同位素标记ZF(4-5)蛋白的表达优化 | 第33-34页 |
| 2.2.4 ZF(4-5)蛋白的纯化 | 第34-36页 |
| 2.3 ZF(4-5)蛋白的表征 | 第36-38页 |
| 2.3.1 ZF(4-5)蛋白的质谱鉴定 | 第36页 |
| 2.3.2 ZF(4-5)蛋白的圆二色光谱分析 | 第36-37页 |
| 2.3.3 ZF(4-5)蛋白的结构稳定性分析 | 第37页 |
| 2.3.4 ZF(4-5)蛋白的旋转相关时间测量 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-46页 |
| 2.4.1 重组质粒pET-32m-ZF(4-5)的构建 | 第38-39页 |
| 2.4.2 ZF(4-5)蛋白的表达优化 | 第39-42页 |
| 2.4.3 ZF(4-5)蛋白分子量的质谱鉴定 | 第42页 |
| 2.4.4 Zn2+对ZF(4-5)蛋白结构稳定性的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.5 ZF(4-5)蛋白在溶液中聚集态的表征 | 第44-45页 |
| 2.4.6 ZF(4-5)蛋白中与Zn2+结合的组氨酸的互变异构体分析 | 第45-46页 |
| 2.5 结论 | 第46-47页 |
| 第三章 INSM1-ZF(4-5)蛋白的液体核磁结构与功能 | 第47-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 供试样品 | 第47页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第47-48页 |
| 3.2 ZF(4-5)蛋白的液体核磁结构解析 | 第48-50页 |
| 3.2.1 ZF(4-5)蛋白核磁谱图的采集与处理 | 第48-49页 |
| 3.2.2 ZF(4-5)蛋白结构解析 | 第49页 |
| 3.2.3 ZF(4-5)蛋白与DNA的滴定实验 | 第49-50页 |
| 3.2.3.1 ZF(4-5)蛋白与DNA的NMR滴定实验 | 第49-50页 |
| 3.2.3.2 ZF(4-5)蛋白与DNA的ITC滴定实验 | 第50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-58页 |
| 3.3.1 ZF(4-5)蛋白的归属及结构计算 | 第50-54页 |
| 3.3.2 ZF(4-5)蛋白与DNA的滴定实验 | 第54-58页 |
| 3.4 结论 | 第58-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
