| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 （Abbreviation） | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 革兰氏阴性菌中分泌系统的概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 I型分泌系统 | 第12页 |
| 1.1.2 II型分泌系统 | 第12-13页 |
| 1.1.3 III型分泌系统 | 第13页 |
| 1.1.4 IV型分泌系统 | 第13-14页 |
| 1.1.5 V型分泌系统 | 第14页 |
| 1.1.6 VI型分泌系统 | 第14-15页 |
| 1.2 VI型分泌系统详述 | 第15-23页 |
| 1.2.1 VI型分泌系统的组成 | 第15-18页 |
| 1.2.2 T6SS的效应分子 | 第18-21页 |
| 1.2.2.1 T6SS效应分子的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2.2 效应分子的分泌机制 | 第19-21页 |
| 1.2.3 VI型分泌系统的调控 | 第21-23页 |
| 1.2.3.1 组蛋白样蛋白：H-NS或H-NS样蛋白 | 第21-22页 |
| 1.2.3.2 σ54 及bEBPs | 第22页 |
| 1.2.3.3 群体感应 | 第22-23页 |
| 1.2.3.4 TfoX及TfoY | 第23页 |
| 1.3 肠外致病性大肠杆菌T6SS的研究进展 | 第23-25页 |
| 2 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 3 材料与方法 | 第26-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-33页 |
| 3.1.1 菌株、质粒与细胞 | 第26-29页 |
| 3.1.2 细胞及实验动物 | 第29页 |
| 3.1.3 工具酶及主要试剂、试剂盒及仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.4 实验所用手术器械 | 第30页 |
| 3.1.5 培养基与抗生素及其配制 | 第30页 |
| 3.1.6 主要缓冲液与相关溶液及其配制 | 第30-32页 |
| 3.1.6.1 琼脂糖凝胶电泳缓冲液及其配制 | 第30-31页 |
| 3.1.6.2 大肠杆菌感受态细胞制备用试剂 | 第31页 |
| 3.1.6.3 大肠杆菌电转化缓冲液 | 第31页 |
| 3.1.6.4 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）缓冲液及试剂 | 第31-32页 |
| 3.6.1.5 其它缓冲液的制备 | 第32页 |
| 3.1.7 使用的引物 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-47页 |
| 3.2.1 猪源肠外致病性大肠杆菌的培养及基因组的提取 | 第33页 |
| 3.2.2 大肠杆菌感受态制备（氯化钙法） | 第33-34页 |
| 3.2.3 猪源肠外致病性大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 3.2.4 猪源肠外致病性大肠杆菌的电转化 | 第34页 |
| 3.2.5 细胞的培养 | 第34-35页 |
| 3.2.5.1 RAW264.7 细胞培养 | 第34-35页 |
| 3.2.5.2 HBMEC细胞培养 | 第35页 |
| 3.2.6 缺失株 Δ0229 构建 | 第35-39页 |
| 3.2.6.1 pRE112Δ0229重组质粒的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.6.2 缺失株 Δ0229 的筛选及PCR鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.7 互补菌株 Δ0229-0229 的构建 | 第39页 |
| 3.2.7.1 pHSG396-0229重组质粒的构建 | 第39页 |
| 3.2.7.2 互补菌株 Δ0229-0229 的筛选及鉴定 | 第39页 |
| 3.2.8 0229 编码蛋白aec28的原核表达 | 第39-41页 |
| 3.2.8.1 pET28a-0229 原核表达质粒的构建 | 第39页 |
| 3.2.8.2 aec28的体外诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.2.8.3 aec28蛋白的SDS-PAGE鉴定及Western blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.9 生长特性测定 | 第41页 |
| 3.2.10 细菌间竞争能力分析 | 第41页 |
| 3.2.11 吞噬后存活试验 | 第41-42页 |
| 3.2.12 粘附侵入能力试验 | 第42-43页 |
| 3.2.13 猪全血杀菌试验 | 第43页 |
| 3.2.14 组织载菌量测定 | 第43页 |
| 3.2.15 细菌RNA的提取及浓度的测定 | 第43-44页 |
| 3.2.16 cDNA模板制备 | 第44-45页 |
| 3.2.16.1 gDNA去除 | 第44页 |
| 3.2.16.2 逆转录cDNA | 第44-45页 |
| 3.2.17 SYBR Green法荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 3.2.18 使用生物学软件 | 第46页 |
| 3.2.19 统计学分析 | 第46-47页 |
| 4 结果与分析 | 第47-60页 |
| 4.1 基因PPECC33_00229（0229）的氨基酸序列分析 | 第47页 |
| 4.2 猪源肠外致病性大肠杆菌缺失株 Δ0229 的构建及鉴定 | 第47-50页 |
| 4.2.1 重组自杀性质粒pRE112-Δ0229 的构建 | 第47-49页 |
| 4.2.2 缺失株 Δ0229 的构建及鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3 Δ0229 互补菌株 Δ0229-0229 的构建及鉴定 | 第50-51页 |
| 4.4 菌株生长特性测定 | 第51-52页 |
| 4.5 细菌间竞争能力分析 | 第52页 |
| 4.6 吞噬后存活能力比较 | 第52-53页 |
| 4.7 粘附侵入比较 | 第53-54页 |
| 4.8 全血杀菌试验 | 第54-55页 |
| 4.9 小鼠体内组织载菌量比较 | 第55页 |
| 4.10 T6SS相关基因转录水平检测 | 第55-56页 |
| 4.11 猪源肠外致病性大肠杆菌aec28的原核表达 | 第56-60页 |
| 4.11.1 0229 基因的克隆及pET28a-0229 原核表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 4.11.2 aec28-His融合蛋白的表达 | 第57-60页 |
| 5 讨论 | 第60-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
