| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 前言 | 第11-18页 |
| 1.1 小RNA病毒科简介 | 第11-12页 |
| 1.1.1 小RNA病毒科特征 | 第11页 |
| 1.1.2 小RNA病毒分类 | 第11页 |
| 1.1.3 小RNA病毒基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.1.4 小RNA病毒基因组的复制和表达 | 第12页 |
| 1.2 肠道病毒属简介 | 第12-13页 |
| 1.2.1 肠道病毒属理化特性 | 第12-13页 |
| 1.2.2 肠道病毒属分类 | 第13页 |
| 1.3 EV71病毒简介 | 第13-14页 |
| 1.3.1 EV71病毒发现及流行病学 | 第13页 |
| 1.3.2 EV71病毒的复制 | 第13-14页 |
| 1.3.3 EV71非结构蛋白3A | 第14页 |
| 1.4 蛋白质的跨膜转运方式 | 第14-17页 |
| 1.4.1 蛋白质的两类跨膜转运途径 | 第14-15页 |
| 1.4.2 共翻译转运途径 | 第15页 |
| 1.4.3 翻译后转运途径 | 第15页 |
| 1.4.4 TA蛋白质转运途径 | 第15-17页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 EV71全长感染性克隆质粒构建 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 质粒、菌株、病毒毒株和细胞 | 第18页 |
| 2.1.4 溶液及培养基配方 | 第18-19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 EV71病毒RNA提取 | 第19-20页 |
| 2.2.2 逆转录合成病毒基因组cDNA | 第20页 |
| 2.2.3 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.2.4 EV71基因组01、02、03三个片段的PCR扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.5 PCR扩增目的片段纯化 | 第22页 |
| 2.2.6 目的片段和载体酶切 | 第22-23页 |
| 2.2.7 目的片段与载体连接 | 第23页 |
| 2.2.8 感受态细胞制备 | 第23页 |
| 2.2.9 质粒转化过程 | 第23-24页 |
| 2.2.10 重组质粒的筛选和鉴定 | 第24页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第24-27页 |
| 2.3.1 EV71基因组片断的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.2 重组质粒pBluescript-01/02/03的构建与鉴定 | 第25页 |
| 2.3.3 重组质粒pBluescript-01-02的构建与鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.4 重组质粒pBluescript-01-02-03的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 EV71非结构蛋白3A的原核表达与抗体制备 | 第28-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 试剂 | 第28页 |
| 3.1.2 仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 菌株、质粒、病毒毒株和细胞 | 第28页 |
| 3.1.4 溶液配方 | 第28-29页 |
| 3.1.5 引物 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 3.2.1 表达载体PET28a-3A构建 | 第29-30页 |
| 3.2.2 融合蛋白诱导 | 第30-31页 |
| 3.2.3 蛋白质Western Blotting鉴定 | 第31页 |
| 3.2.4 3A抗体的制备 | 第31页 |
| 3.2.5 Lipofactamine2000介导转染RD细胞 | 第31页 |
| 3.2.6 细胞总蛋白提取 | 第31页 |
| 3.2.7 细胞免疫荧光检测 | 第31-32页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 3a基因的扩增 | 第32页 |
| 3.3.2 原核表达载体PET28a-3A的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 3A重组蛋白的表达与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.4 多克隆抗体制备与检测 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第四章 3A蛋白定位机制的初步研究 | 第36-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 4.1.1 试剂 | 第36页 |
| 4.1.2 仪器 | 第36页 |
| 4.1.3 菌株、质粒、毒株和细胞 | 第36页 |
| 4.1.4 溶液配方 | 第36页 |
| 4.1.5 引物 | 第36-38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38-40页 |
| 4.2.1 真核表达载体构建 | 第38-39页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀(Co-IP) | 第39页 |
| 4.2.3 干扰RNA合成 | 第39-40页 |
| 4.2.4 TCID_(50)测定 | 第40页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第40-50页 |
| 4.3.1 3A不同结构域GFP融合表达载体的构建与鉴定 | 第40-42页 |
| 4.3.2 3A蛋白在细胞中的定位 | 第42-46页 |
| 4.3.3 3A蛋白定位机制研究 | 第46-48页 |
| 4.3.4 ASNA1蛋白对病毒复制影响 | 第48-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-56页 |
| 硕士期间发表论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
