| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-46页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 药物筛选研究进展 | 第16-22页 |
| 1.2.1 紫外-可见分光光度法 | 第18页 |
| 1.2.2 荧光检测技术 | 第18-19页 |
| 1.2.3 液相色谱法 | 第19页 |
| 1.2.4 虚拟筛选 | 第19-20页 |
| 1.2.5 生物传感法 | 第20-21页 |
| 1.2.6 毛细管电泳法 | 第21页 |
| 1.2.7 微流控芯片及微阵列技术 | 第21-22页 |
| 1.3 细胞凋亡及其检测研究进展 | 第22-28页 |
| 1.3.1 细胞凋亡概述 | 第22-23页 |
| 1.3.2 细胞凋亡机制概述 | 第23-24页 |
| 1.3.3 检测细胞凋亡的方法研究进展 | 第24-28页 |
| 1.3.3.1 形态学检测 | 第25页 |
| 1.3.3.2 DNA片段化检测 | 第25-26页 |
| 1.3.3.3 原位末端缺口标记法 | 第26页 |
| 1.3.3.4 基于caspases蛋白酶检测 | 第26-27页 |
| 1.3.3.5 基于磷脂酰丝氨酸外翻的凋亡检测 | 第27页 |
| 1.3.3.6 线粒体膜电位检测 | 第27-28页 |
| 1.4 荧光相关光谱技术研究进展 | 第28-32页 |
| 1.4.1 FCS技术的发展 | 第28-29页 |
| 1.4.2 FCS系统的结构 | 第29页 |
| 1.4.3 FCS技术的应用 | 第29-32页 |
| 1.4.3.1 分子扩散行为研究 | 第29页 |
| 1.4.3.2 荧光分子的光动力学性质研究 | 第29-30页 |
| 1.4.3.3 分子间相互作用研究 | 第30-31页 |
| 1.4.3.4 化学反应动力学研究 | 第31页 |
| 1.4.3.5 活细胞研究 | 第31-32页 |
| 1.4.3.6 药物筛选 | 第32页 |
| 1.4.3.7 疾病诊断 | 第32页 |
| 1.5 本论文的选题思路 | 第32-34页 |
| 参考文献 | 第34-46页 |
| 第二章 基于荧光相关光谱药物筛选新方法研究 | 第46-78页 |
| 2.1 引言 | 第46-48页 |
| 2.2 实验部分 | 第48-51页 |
| 2.2.1 试剂与仪器 | 第48-49页 |
| 2.2.2 FCS装置 | 第49-50页 |
| 2.2.3 达沙替尼衍生物的合成及纯化 | 第50页 |
| 2.2.4 Alexa 488-dasatinb的合成、纯化及表征 | 第50页 |
| 2.2.5 聚二甲基硅氧烷/玻璃微孔芯片的制作 | 第50-51页 |
| 2.2.6 FCS测定结合反应 | 第51页 |
| 2.2.7 FCS测定竞争反应 | 第51页 |
| 2.3 理论模型的建立 | 第51-57页 |
| 2.3.1 FCS数据的处理 | 第51-53页 |
| 2.3.2 荧光探针与靶蛋白的结合反应 | 第53-54页 |
| 2.3.3 候选化合物的竞争反应 | 第54-57页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第57-73页 |
| 2.4.1 达沙替尼-己酸衍生物及荧光探针的合成 | 第57-59页 |
| 2.4.2 方法可行性分析 | 第59-61页 |
| 2.4.3 反应溶液的优化 | 第61页 |
| 2.4.4 结合反应及竞争反应速率的测定 | 第61-63页 |
| 2.4.5 探针与ABL1解离常数Kd测定 | 第63页 |
| 2.4.6 药物对结合复合物的竞争反应研究 | 第63-67页 |
| 2.4.7 聚二甲基硅氧烷/玻璃微孔芯片研究药物对结合复合物的竞争反应 | 第67-70页 |
| 2.4.8 蛋白酶抑制剂解离常数的测定 | 第70-73页 |
| 2.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 第三章 基于荧光相关光谱的细胞凋亡检测新方法研究 | 第78-107页 |
| 3.1 引言 | 第78-80页 |
| 3.2 实验部分 | 第80-86页 |
| 3.2.1 试剂与仪器 | 第80页 |
| 3.2.2 溶液配制 | 第80-81页 |
| 3.2.3 FCS系统及数据处理 | 第81-83页 |
| 3.2.4 SYBR Green I-DNA荧光光谱及ds DNA浓度工作曲线的测定 | 第83页 |
| 3.2.5 FCS检测检测DNA marker | 第83-84页 |
| 3.2.6 细胞培养 | 第84-85页 |
| 3.2.7 药物诱导PANC-1 细胞凋亡 | 第85页 |
| 3.2.8 FCS检测凋亡细胞DNA | 第85页 |
| 3.2.9 FCS检测细胞裂解液中DNA | 第85页 |
| 3.2.10 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第85页 |
| 3.2.11 流式细胞仪检测凋亡细胞 | 第85-86页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第86-102页 |
| 3.3.1 SYBR Green I-DNA复合物荧光光谱测定及ds DNA浓度的测定 | 第86-87页 |
| 3.3.2 方法可行性研究 | 第87-93页 |
| 3.3.3 FCS检测凋亡细胞的DNA | 第93-96页 |
| 3.3.4 FCS检测细胞裂解液中的DNA | 第96-99页 |
| 3.3.5 方法重现性考察 | 第99-100页 |
| 3.3.6 DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术对照试验 | 第100-102页 |
| 3.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-107页 |
| 第四章 基于荧光量子点原位荧光方法研究凋亡细胞 | 第107-134页 |
| 4.1 引言 | 第107-109页 |
| 4.2 实验部分 | 第109-114页 |
| 4.2.1 试剂 | 第109-110页 |
| 4.2.2 QDs与AV的生物连接 | 第110-111页 |
| 4.2.3 QDs-AV的纯化 | 第111-112页 |
| 4.2.4 QDs-AV的表征方法 | 第112页 |
| 4.2.4.1 FCS表征 | 第112页 |
| 4.2.4.2 毛细管电泳表征 | 第112页 |
| 4.2.5 QDs-AV与细胞共孵育 | 第112-113页 |
| 4.2.6 FCS-CLSM系统及对细胞的检测 | 第113-114页 |
| 4.2.7 流式细胞仪检测凋亡细胞 | 第114页 |
| 4.3 结果和讨论 | 第114-129页 |
| 4.3.1 QDs的紫外吸收光谱及荧光光谱 | 第114-115页 |
| 4.3.2 QDs-AV的表征 | 第115-117页 |
| 4.3.3 QDs及其AV复合物的Zeta电位变化 | 第117-118页 |
| 4.3.4 QDs-COOH及其AV复合物对不同状态细胞成像研究 | 第118-122页 |
| 4.3.5 QDs-PEG-NH2及其AV复合物对不同状态细胞成像研究 | 第122-125页 |
| 4.3.6 QD525-PEG-NH2-AV探针检测细胞凋亡 | 第125-126页 |
| 4.3.7 共聚焦激光扫描荧光显微成像检测细胞凋亡 | 第126-127页 |
| 4.3.8 FCS分析 | 第127-129页 |
| 4.4 本章小结 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-134页 |
| 第五章 全文总结与展望 | 第134-136页 |
| 5.1 全文主要内容和结论 | 第134-135页 |
| 5.2 展望 | 第135-136页 |
| 附录 | 第136-138页 |
| 附录 1. 第二章 2.4.1 化合物4的MS结果及分子式推测 | 第136-137页 |
| 附录 2. 第二章 2.4.1 化合物A的MS结果及分子式推测 | 第137-138页 |
| 符号与标记 | 第138-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第144页 |
