| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 植物角质层蜡质的研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1.1 植物角质层蜡质的化学组成及结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 植物角质层蜡质的合成途径 | 第12-15页 |
| 1.1.3 蜡质合成相关基因的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2 甘蓝型油菜蜡质研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 脂肪酰-CoA还原酶(fatty acyl-CoA reductase, FAR)研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 脂肪醇的作用及生物合成 | 第20页 |
| 1.3.2 脂肪酰-CoA还原酶(FAR) | 第20-23页 |
| 第2章 引言 | 第23-25页 |
| 第3章 材料方法 | 第25-37页 |
| 3.1 植物材料 | 第25页 |
| 3.2 菌株和载体 | 第25页 |
| 3.3 主要仪器和设备 | 第25页 |
| 3.4 主要试剂及试剂盒 | 第25-26页 |
| 3.5 核酸提取 | 第26-28页 |
| 3.5.1 基因组总DNA的提取 | 第26-27页 |
| 3.5.2 总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.5.3 RNA的反转录 | 第27-28页 |
| 3.6 BnCER4基因家族编码区的扩增 | 第28页 |
| 3.6.1 引物设计 | 第28页 |
| 3.6.2 BnCER4基因家族各成员编码区的扩增 | 第28页 |
| 3.7 亚克隆和测序 | 第28-30页 |
| 3.7.1 琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 3.7.2 目的片段胶回收 | 第29页 |
| 3.7.3 胶回收目的片段与T载体连接 | 第29页 |
| 3.7.4 重组质粒DNA转化大肠杆菌感受态 | 第29-30页 |
| 3.7.5 转化子的蓝白菌落筛选及菌液PCR扩增鉴定 | 第30页 |
| 3.8 BnCER4基因家族及其蛋白序列的生物信息学分析 | 第30页 |
| 3.9 BnCER4基因家族成员表达的器官组织特异性qRT-PCR检测 | 第30-31页 |
| 3.10 BnCER4家族成员在中双 11、无蜡材料中的表达分析 | 第31页 |
| 3.11 几种激素处理对BnCER4-1/2 的诱导表达分析 | 第31-32页 |
| 3.12 BnCER4-4 超表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.12.1 载体pCambia2301G以及pMD19-T-BnCER4-4 质粒提取 | 第32页 |
| 3.12.2 质粒的酶切与回收 | 第32页 |
| 3.12.3 目的片段与载体pCambia2301G的连接与转化 | 第32-33页 |
| 3.12.4 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第33页 |
| 3.13 BnCER4-3/4 RNA干扰载体的构建 | 第33-37页 |
| 3.13.1 干扰片段的克隆 | 第33-34页 |
| 3.13.2 pFGC5941M载体骨架制备和反义片段的插入 | 第34-35页 |
| 3.13.3 中间载体的酶切和正义片段的插入 | 第35页 |
| 3.13.4 RNAi载体转化根癌农杆菌 | 第35-37页 |
| 第4章 结果与分析 | 第37-59页 |
| 4.1 甘蓝型油菜核酸的提取 | 第37-38页 |
| 4.1.1 甘蓝型油菜基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 4.1.2 甘蓝型油菜总RNA的提取与cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 4.2 BnCER4基因家族编码区cDNA的克隆 | 第38-39页 |
| 4.3 BnCER4基因家族成员的核苷酸水平分析 | 第39-47页 |
| 4.4 BnCER4基因家族成员的氨基酸水平分析 | 第47-52页 |
| 4.4.1 预测的BnCER4家族成员蛋白的基本参数 | 第47-48页 |
| 4.4.2 亚细胞定位 | 第48页 |
| 4.4.3 保守域预测 | 第48页 |
| 4.4.4 同源性分析 | 第48-51页 |
| 4.4.5 BnCER4蛋白的二级结构预测 | 第51-52页 |
| 4.4.6 BnCER4蛋白的三级结构预测 | 第52页 |
| 4.5 BnCER4基因家族成员的表达分析 | 第52-55页 |
| 4.5.1 BnCER4基因家族成员的器官组织特异性表达特征 | 第52-53页 |
| 4.5.2 BnCER4家族成员在有蜡粉与无蜡粉材料中的差异表达 | 第53-54页 |
| 4.5.3 外源激素对BnCER4-1/2 的诱导表达分析 | 第54-55页 |
| 4.6 BnCER4-4 超表达载体的构建 | 第55页 |
| 4.7 BnCER4-4 RNA干扰载体的构建 | 第55-59页 |
| 4.7.1 干扰片段的克隆 | 第55-56页 |
| 4.7.2 载体骨架的制备和反义片段的插入 | 第56-57页 |
| 4.7.3 正义片段的插入和RNA干扰载体的获得 | 第57-59页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第59-63页 |
| 5.1 讨论 | 第59-61页 |
| 5.1.1 BnCER4基因家族编码脂肪酰-CoA还原酶 | 第59-60页 |
| 5.1.2 甘蓝型油菜BnCER4基因的表达特征及成员间的分化 | 第60页 |
| 5.1.3 荧光定量PCR技术 | 第60-61页 |
| 5.2 结论 | 第61-63页 |
| 5.2.1 BnCER4基因编码典型的FAR蛋白 | 第61页 |
| 5.2.2 BnCER4基因家族成员在甘蓝型油菜中的表达分析 | 第61-62页 |
| 5.2.3 构建了BnCER4-4 的超表达载体 | 第62页 |
| 5.2.4 构建了BnCER4-3/4 的RNAi载体 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第73页 |
