附录 | 第6-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
前言 | 第12-13页 |
材料和方法 | 第13-31页 |
1. 实验材料 | 第13-16页 |
1.1 实验仪器和设备 | 第13-14页 |
1.2 细胞培养及处理相关试剂 | 第14-15页 |
1.3 流式细胞术相关试剂 | 第15页 |
1.4 实时荧光定量PCR相关试剂 | 第15页 |
1.5 Western blot相关试剂 | 第15-16页 |
1.6 RNA干扰相关试剂 | 第16页 |
1.7 实验动物 | 第16页 |
1.8 实验细胞系 | 第16页 |
2. 实验方法 | 第16-31页 |
2.1 细胞复苏、传代与冻存 | 第16-17页 |
2.2 细胞计数 | 第17-18页 |
2.3 CD133阳性细胞的分选纯化和培养 | 第18页 |
2.4 流式细胞术检测 | 第18-19页 |
2.5 实时荧光定量PCR | 第19-21页 |
2.5.1 Trizol提取RNA | 第19-20页 |
2.5.2 样品cDNA合成 | 第20页 |
2.5.3 RT-PCR | 第20-21页 |
2.6 Western blot | 第21-27页 |
2.6.1 细胞样品蛋白的提取 | 第21-22页 |
2.6.2 蛋白定量(BCA法) | 第22页 |
2.6.3 蛋白变性 | 第22-23页 |
2.6.4 配制凝胶 | 第23-25页 |
2.6.5 电泳 | 第25页 |
2.6.6 转膜 | 第25-26页 |
2.6.7 封闭及抗体孵育 | 第26-27页 |
2.6.8 显影 | 第27页 |
2.7 克隆形成实验 | 第27页 |
2.8 裸鼠皮下成瘤试验 | 第27-28页 |
2.9 实时无标记细胞迁移分析试验 | 第28页 |
2.10 Transwell侵袭小室试验 | 第28-29页 |
2.11 CCK-8 试验 | 第29页 |
2.12 小干扰RNA试验 | 第29-30页 |
2.13 数据处理及统计分析 | 第30-31页 |
结果 | 第31-45页 |
1. 分选纯化CD133阳性肝癌干细胞 | 第31页 |
2. 脂多糖对肝癌干细胞CD133表达的影响 | 第31-34页 |
3. 脂多糖可维持肝癌干细胞中其它干性相关基因的表达 | 第34页 |
4. 脂多糖对肝癌干细胞干性特征的影响 | 第34-40页 |
4.1 脂多糖对肝癌干细胞克隆形成能力和成瘤能力的影响 | 第34-37页 |
4.2 脂多糖对肝癌干细胞迁移和侵袭能力的影响 | 第37-39页 |
4.3 脂多糖对肝癌干细胞的化疗抵抗能力的影响 | 第39-40页 |
5. 脂多糖对肝癌干细胞干性维持的相关分子机制 | 第40-45页 |
5.1 脂多糖对肝癌干细胞中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响 | 第40页 |
5.2 特异性干扰HIF-1α表达对脂多糖刺激培养的肝癌干细胞中CD133及其它干性相关基因表达的影响 | 第40-41页 |
5.3 特异性干扰HIF-1α的表达对脂多糖刺激培养的肝癌干细胞干性特征的影响 | 第41-43页 |
5.4 脂多糖可激活NF-κB通路进而调节肝癌干细胞的HIF-1α和CD133表达 | 第43-45页 |
讨论 | 第45-46页 |
结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-51页 |
综述 | 第51-74页 |
参考文献 | 第62-74页 |
硕士期间获奖及学术论文发表情况 | 第74-75页 |
致谢 | 第75-76页 |