| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-17页 |
| 研究现状、成果 | 第13-16页 |
| 研究目的、方法 | 第16-17页 |
| 一、K562细胞cDNA噬菌体表达文库构建 | 第17-42页 |
| 1.1 对象和方法 | 第17-33页 |
| 1.1.1 实验对象 | 第17页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第17-19页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 1.1.4 主要液体配置 | 第19-21页 |
| 1.1.5 实验方法 | 第21-33页 |
| 1.2 结果 | 第33-37页 |
| 1.2.1 RNA的质量检测 | 第33-34页 |
| 1.2.2 LD-PCR琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 1.2.3 过柱后cDNA凝胶电泳 | 第35页 |
| 1.2.4 蓝白斑方法鉴定重组率 | 第35页 |
| 1.2.5 PCR方法鉴定插入子的代表性 | 第35-36页 |
| 1.2.6 初始文库滴度 | 第36页 |
| 1.2.7 扩增文库滴度 | 第36-37页 |
| 1.3 讨论 | 第37-40页 |
| 1.3.1 总RNA的提取与质量检测 | 第37页 |
| 1.3.2 cDNA展示文库质量评价 | 第37-39页 |
| 1.3.3 K562文库代表人骨髓CD34+细胞文库 | 第39-40页 |
| 1.3.4 噬菌体载体构建cDNA表达文库优于质粒载体 | 第40页 |
| 1.4 小结 | 第40-42页 |
| 二SEREX方法筛选IRP患者骨髓造血干细胞的自身抗原 | 第42-52页 |
| 2.1 对象和方法 | 第42-45页 |
| 2.1.1 实验标本 | 第42页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 2.1.3 实验步骤 | 第42-45页 |
| 2.2 结果 | 第45-46页 |
| 2.2.1 最佳的文库稀释比例 | 第45页 |
| 2.2.2 免疫筛选后NC膜上的阳性噬菌斑 | 第45页 |
| 2.2.3 测序结果以及BLAST比对结果 | 第45-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-50页 |
| 2.3.1 免疫筛选的注意事项 | 第46-48页 |
| 2.3.2 目的克隆由噬菌体载体 λTriplEx2转入质粒载体pTriplEx2 | 第48-50页 |
| 2.3.3 关于测序 | 第50页 |
| 2.4 小结 | 第50-52页 |
| 三、阳性克隆蛋白表达纯化 | 第52-67页 |
| 3.1 对象和方法 | 第52-59页 |
| 3.1.1 主要标本 | 第52页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第52页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 3.1.4 主要液体配置 | 第52页 |
| 3.1.5 实验步骤 | 第52-59页 |
| 3.2 结果 | 第59-64页 |
| 3.2.1 目的基因克隆 | 第59-62页 |
| 3.2.2 蛋白表达 | 第62-63页 |
| 3.2.3 蛋白纯化 | 第63-64页 |
| 3.2.4 三种蛋白复性后的浓度 | 第64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-66页 |
| 3.3.1 表达载体的选择 | 第64页 |
| 3.3.2 关于目的基因克隆 | 第64-65页 |
| 3.3.3 细菌裂解方法的选择 | 第65页 |
| 3.3.4 关于包涵体 | 第65-66页 |
| 3.4 小结 | 第66-67页 |
| 四、初步验证目的蛋白的抗原性 | 第67-86页 |
| 4.1 对象和方法 | 第67-71页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第67页 |
| 4.1.2 实验标本 | 第67页 |
| 4.1.3 实验仪器： | 第67页 |
| 4.1.4 实验主要试剂 | 第67-68页 |
| 4.1.5 实验所需液体配制 | 第68页 |
| 4.1.6 实验步骤 | 第68-71页 |
| 4.2 结果 | 第71-83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-85页 |
| 4.4 小结 | 第85-86页 |
| 全文结论 | 第86-87页 |
| 论文创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-93页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第93-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 综述一 SEREX及其在自身免疫研究方面的应用 | 第95-102页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 综述二 噬菌体展示技术及其在自身免疫病研究中的应用 | 第102-116页 |
| 参考文献 | 第113-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
