| 致谢 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.1 猪流行性腹泻概述 | 第10页 |
| 1.1.2 猪流行性腹泻病毒概述 | 第10页 |
| 1.1.3 PEDV疫苗的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.4 疫苗在PEDV防治过程中的不足 | 第11页 |
| 1.2 单链抗体研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 免疫球蛋白简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 抗体的发展历程 | 第12-13页 |
| 1.2.3 单链抗体简介 | 第13-14页 |
| 1.2.4 单链抗体在原核表达系统中的表达 | 第14页 |
| 1.2.5 单链抗体在真核表达系统中的表达 | 第14页 |
| 1.2.6 猪源化嵌合单链抗体 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第17-20页 |
| 3.1.1 菌株、载体、质粒及相关蛋白 | 第17页 |
| 3.1.2 实验相关动物及组织 | 第17页 |
| 3.1.3 杂交瘤细胞 | 第17页 |
| 3.1.4 主要试剂及试剂盒 | 第17-18页 |
| 3.1.5 主要实验仪器设备 | 第18-19页 |
| 3.1.6 常用溶液配方 | 第19-20页 |
| 3.2 实验方法 | 第20-43页 |
| 3.2.1 从杂交瘤细胞中扩增抗体可变区基因 | 第20-26页 |
| 3.2.2 小鼠免疫及抗体基因的克隆 | 第26-28页 |
| 3.2.3 猪IgG Fc的克隆 | 第28-29页 |
| 3.2.4 单链抗体基因scFv的构建、表达及检测 | 第29-38页 |
| 3.2.5 猪源化单链抗体基因scFv-Fc的构建、表达及检测 | 第38-42页 |
| 3.2.6 Western-Blot反应检测scFv蛋白和sc Fv-Fc蛋白的种属特异性 | 第42-43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-62页 |
| 4.1 从杂交瘤细胞中扩增抗体基因 | 第43-47页 |
| 4.1.1 杂交瘤细胞总RNA的提取及反转录cDNA | 第43页 |
| 4.1.2 扩增抗体重链可变区 | 第43-44页 |
| 4.1.3 扩增抗体轻链可变区 | 第44-45页 |
| 4.1.4 抗PEDV抗体重链可变区基因的序列测定及分析 | 第45-46页 |
| 4.1.5 抗PEDV抗体轻链可变区基因的序列测定及分析 | 第46-47页 |
| 4.2 从免疫小鼠脾脏中扩增抗体基因 | 第47-50页 |
| 4.2.1 小鼠免疫 | 第47页 |
| 4.2.2 小鼠脾脏总RNA提取及反转录cDNA | 第47-48页 |
| 4.2.3 确定抗PEDV抗体重链可变区基因和轻链可变区基因序列 | 第48-50页 |
| 4.3 单链抗体基因scFv的构建、表达及鉴定 | 第50-55页 |
| 4.3.1 SOE-PCR法构建scFv | 第50-51页 |
| 4.3.2 表达载体pEASY-scFv构建 | 第51页 |
| 4.3.3 表达载体pEASY-scFv诱导表达 | 第51页 |
| 4.3.4 IPTG诱导剂量与表达效率的关系 | 第51-52页 |
| 4.3.5 IPTG诱导时间与表达效率的关系 | 第52-53页 |
| 4.3.6 IPTG诱导温度与表达效率的关系 | 第53页 |
| 4.3.7 Western-Blot检测目的蛋白 | 第53页 |
| 4.3.8 目的蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 4.3.9 Elisa检测 | 第54-55页 |
| 4.4 猪源化嵌合单链抗体scFv-Fc的构建、表达及鉴定 | 第55-60页 |
| 4.4.1 SOE-PCR法构建scFv-Fc | 第55页 |
| 4.4.2 pMD19-T-scFv-Fc和pET28a双酶切 | 第55-56页 |
| 4.4.3 菌液PCR检测及单酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 4.4.4 IPTG诱导剂量与表达效率的关系 | 第57页 |
| 4.4.5. IPTG诱导时间与表达效率的关系 | 第57-58页 |
| 4.4.6 IPTG诱导温度与表达效率的关系 | 第58-59页 |
| 4.4.7 确定目的蛋白表达形式 | 第59页 |
| 4.4.8 Western-Blot检测目的蛋白 | 第59页 |
| 4.4.9 目的蛋白纯化 | 第59-60页 |
| 4.4.10 Elisa检测 | 第60页 |
| 4.5 Western-Blot检测scFv和scFv-Fc单链抗体 | 第60-62页 |
| 5 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 5.1 小结 | 第62页 |
| 5.2 讨论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录:scFv-Fc基因序列 | 第70-72页 |
| 作者读研期间发表文章 | 第72-73页 |
| abstract | 第73页 |
