| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| 1.1 转录因子 | 第8-12页 |
| 1.1.1 转录因子简介 | 第8页 |
| 1.1.2 NAC类转录因子 | 第8-11页 |
| 1.1.2.1 NAC类转录因子简介 | 第8-9页 |
| 1.1.2.2 NAC类转录因子的转录水平调控 | 第9页 |
| 1.1.2.3 NAC类转录因子的转录后调控 | 第9-10页 |
| 1.1.2.4 NAC类转录因子的翻译后调控 | 第10页 |
| 1.1.2.5 NAC类转录因子对根系发育影响的研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.3 WRKY类转录因子 | 第11-12页 |
| 1.1.3.1 WRKY类转录因子简介 | 第11页 |
| 1.1.3.2 WRKY类转录因子的生物学功能 | 第11页 |
| 1.1.3.3 WRKY类转录因子的调控机制 | 第11-12页 |
| 1.2 植物转录因子功能分析的主要方法 | 第12页 |
| 1.2.1 瞬时表达分析技术 | 第12页 |
| 1.2.2 基因沉默技术 | 第12页 |
| 1.3 烟碱 | 第12-15页 |
| 1.3.1 烟碱的生物合成过程 | 第12-13页 |
| 1.3.2 烟碱生物合成的调控 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-33页 |
| 3.1 材料及培养条件 | 第16-17页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第16页 |
| 3.1.2 烟草培养条件 | 第16页 |
| 3.1.3 菌株、载体及主要试剂 | 第16-17页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第17页 |
| 3.2 实验方法 | 第17-33页 |
| 3.2.1 烟草总DNA的提取 | 第17-18页 |
| 3.2.2 烟草总RNA的提取 | 第18页 |
| 3.2.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| 3.2.4 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第19页 |
| 3.2.5 反转录 | 第19-20页 |
| 3.2.6 NtNAC-R1 RNAi干扰载体的构建 | 第20-24页 |
| 3.2.6.1 获得模板基因及目的条带 | 第20-22页 |
| 3.2.6.2 克隆载体pMDTM19-T-N283的构建 | 第22页 |
| 3.2.6.3 NtNAC-R1 RNAi干扰载体的构建 | 第22-24页 |
| 3.2.7 农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草愈伤组织 | 第24-25页 |
| 3.2.7.1 烟草无菌苗的获得 | 第24页 |
| 3.2.7.2 烟草叶盘转化法 | 第24-25页 |
| 3.2.8 转基因苗的鉴定及检测 | 第25-27页 |
| 3.2.8.1 转基因苗的鉴定 | 第25-26页 |
| 3.2.8.2 检测转基因烟苗的基因表达量 | 第26-27页 |
| 3.2.9 构建NtWRKY-R15’UTR缺失载体 | 第27-31页 |
| 3.2.9.1 NtWRKY-R15’UTR序列的顺式作用元件分析 | 第27页 |
| 3.2.9.2 构建pCAMBIA1391-NtWRKY-R1-pro:U386 | 第27-30页 |
| 3.2.9.3 构建pCAMBIA1391-NtWRKY-R1-pro:U1884 | 第30-31页 |
| 3.2.10 NtWRKY-R15’UTR缺失载体的瞬时表达 | 第31-32页 |
| 3.2.11 GUS组织化学染色 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-40页 |
| 4.1 NtNAC-R1 RNAi干扰载体构建 | 第33-35页 |
| 4.2 NtNAC-R1 RNAi干扰载体转化烟草 | 第35-36页 |
| 4.3 转基因烟草根系中NtNAC-R1、PMT、NtWRKY-R1表达量分析 | 第36-37页 |
| 4.4 NtWRKY-R1的 5’UTR缺失载体的构建 | 第37-39页 |
| 4.4.1 构建pCAMBIA1391-NtWRKY-R1-pro:U386 | 第37-38页 |
| 4.4.2 构建pCAMBIA1391-NtWRKY-R1-pro:U1884 | 第38-39页 |
| 4.5 NtWRKY-R15’UTR缺失载体的瞬时表达及GUS组织化学染色 | 第39-40页 |
| 5 讨论与结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| ABSTRACT | 第45页 |
