| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 L-丝氨酸概述 | 第7-8页 |
| 1.1.1 L-丝氨酸理化性质 | 第7页 |
| 1.1.2 L-丝氨酸应用 | 第7-8页 |
| 1.2 L-丝氨酸的合成方法 | 第8-9页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第8页 |
| 1.2.2 蛋白质提取法 | 第8页 |
| 1.2.3 酶法转化 | 第8页 |
| 1.2.4 微生物发酵法 | 第8-9页 |
| 1.3 微生物发酵产L-丝氨酸研究进展 | 第9-11页 |
| 1.3.1 大肠杆菌发酵产L-丝氨酸 | 第9-10页 |
| 1.3.2 谷氨酸棒杆菌发酵产L-丝氨酸 | 第10-11页 |
| 1.4 微生物利用甘油生产高附加值产品的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.5 立题意义 | 第12-13页 |
| 1.6 研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-26页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.2 引物 | 第15-17页 |
| 2.3 主要试剂和试剂盒 | 第17页 |
| 2.4 培养基和相关溶液 | 第17页 |
| 2.5 实验仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.6 实验方法 | 第18-26页 |
| 2.6.1 大肠杆菌的保藏、活化及培养 | 第18-19页 |
| 2.6.2 大肠杆菌利用甘油代谢进化 | 第19页 |
| 2.6.3 大肠杆菌耐受L-丝氨酸的研究 | 第19页 |
| 2.6.4 大肠杆菌化转感受态细胞的制备 | 第19页 |
| 2.6.5 大肠杆菌电转感受态细胞的制备（用于基因敲除） | 第19页 |
| 2.6.6 大肠杆菌感受态细胞的转化（化转） | 第19-20页 |
| 2.6.7 大肠杆菌感受态细胞的转化（电转化） | 第20页 |
| 2.6.8 大肠杆菌基因组的提取 | 第20页 |
| 2.6.9 目的基因扩增 | 第20页 |
| 2.6.10 菌落PCR | 第20-21页 |
| 2.6.11 重叠PCR扩增基因敲除的靶片段 | 第21页 |
| 2.6.12 平末端PCR产物添A反应 | 第21页 |
| 2.6.13 琼脂糖凝胶电泳及目的片段回收 | 第21-22页 |
| 2.6.14 大肠杆菌中质粒的提取 | 第22页 |
| 2.6.15 大肠杆菌基因敲除的方法 | 第22-23页 |
| 2.6.16 质粒pACYCDuet-eamA构建 | 第23-25页 |
| 2.6.17 分析方法 | 第25-26页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第26-43页 |
| 3.1 合成和降解途径改造对大肠杆菌积累L-丝氨酸的影响 | 第26-33页 |
| 3.1.1 基因tdcG敲除菌株的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.2 基因sdaA敲除菌株的构建 | 第27页 |
| 3.1.3 基因sdaB敲除菌株的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.4 基因serA点突变菌株的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.5 重组菌和出发菌发酵性能分析 | 第29-33页 |
| 3.2 提高重组菌4W利用甘油的速率 | 第33-34页 |
| 3.2.1 适应性进化对菌株发酵性能的影响 | 第33-34页 |
| 3.3 提高重组菌4W对L-丝氨酸的耐受 | 第34-38页 |
| 3.3.1 基因ROORM（rhtA、ompX、opgE、rybA、mntS）敲除菌株的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组菌4WE（4W-pACYCDuet-eam A）的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.3 重组菌L-丝氨酸耐受及发酵性能分析 | 第36-38页 |
| 3.4 重组菌4WAE发酵甘油产L-丝氨酸 | 第38-43页 |
| 3.4.1 重组菌4WAE发酵过程分析 | 第38页 |
| 3.4.2 发酵培养基优化 | 第38-41页 |
| 3.4.3 重组菌4WAE分批发酵 | 第41页 |
| 3.4.4 重组菌4WAE补料分批发酵 | 第41-43页 |
| 结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 附录 作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第49页 |
