| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 缩写词 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-39页 |
| 一、乙型肝炎病毒 | 第14-25页 |
| 1. HBV病毒基因组和病毒颗粒 | 第14-16页 |
| 2. HBV的复制策略和生活史、感染和流行病学分析 | 第16-19页 |
| 3. HBV病毒蛋白及功能 | 第19-22页 |
| 4. HBV基因型 | 第22-23页 |
| 5. HBV与HCC的发生与发展 | 第23-25页 |
| 二、细胞凋亡及其分子机理 | 第25-30页 |
| 1. Bcl-2家族及BH3基序 | 第27-28页 |
| 2. HBx的类BH3基序 | 第28-29页 |
| 3. Ca~(2+)信号通路 | 第29-30页 |
| 三、HBx蛋白的功能性研究 | 第30-38页 |
| 四、本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 材料和方法 | 第39-60页 |
| 一、材料 | 第39-46页 |
| 1. 主要仪器 | 第39-40页 |
| 2. 主要试剂与材料 | 第40-42页 |
| 3. 常用溶液及试剂配制 | 第42-46页 |
| 二、方法 | 第46-60页 |
| 1. 分子克隆 | 第46-51页 |
| 2. 酶联免疫吸附法(ELISA)及化学发光酶联免疫分析(CLEIA) | 第51-52页 |
| 3. 细胞培养 | 第52-57页 |
| 4. 蛋白相关鉴定工作 | 第57-60页 |
| 第三章 实验结果 | 第60-82页 |
| 一、HBx蛋白相关真核表达载体的构建 | 第60-65页 |
| 1. A/B/C/D四种不同基因型pcDNA3.1-HBx真核表达质粒的构建 | 第60-62页 |
| 2. 受四环素诱导的慢病毒表达质粒p113.7-pTRE -HBx (A/B/C/D)的构建 | 第62-65页 |
| 二、四环素诱导的、稳定表达A/B/C/D四种不同基因型HBx蛋白的细胞株构建 | 第65-70页 |
| 1. 包装受四环素调控、表达A/B/C/D四种不同基因型HBx蛋白的慢病毒 | 第66页 |
| 2. 慢病毒感染HepG2-tet-on-advanced细胞构建稳定整合细胞株 | 第66-67页 |
| 3. 四种不同基因型HBx稳定整合细胞株的体外验证 | 第67-70页 |
| 三、HBx蛋白具有抑制细胞转化和诱导细胞凋亡的能力 | 第70-74页 |
| 1. HBx抑制细胞转化及诱导细胞凋亡的初步探索 | 第70-71页 |
| 2. mRNA测序分析HBx对细胞基因转录的影响 | 第71-73页 |
| 3. Bcl-2是HBx诱导凋亡的潜在靶标 | 第73-74页 |
| 四、HBx蛋白通过其BH3基序与Bcl-2蛋白直接相互作用引起细胞Ca~(2+)浓度上调从而诱导细胞凋亡 | 第74-78页 |
| 1. 免疫共沉淀方法验证在哺乳动物细胞中HBx蛋白与Bcl-2、Bcl-xL直接相互作用 | 第74-75页 |
| 2. 乙肝复制子表达的HBx蛋白与Bcl-2/Bcl-xl相互作用 | 第75页 |
| 3. 流式细胞仪分析证实HBx通过其类BH3基序促进细胞凋亡 | 第75-76页 |
| 4. HBx通过其类BH3基序上调细胞内Ca~(2+)浓度 | 第76-77页 |
| 5. Bcl-2和Bcl-xL是HBx诱导细胞内钙离子浓度上调的关键蛋白 | 第77-78页 |
| 6. HBx竞争抑制IP3R与Bcl-2之间的相互作用 | 第78页 |
| 五、A/B/C/D不同基因型HBx蛋白诱导凋亡能力差异性分析 | 第78-82页 |
| 1. A/B/C/D四种不同基因型HBx蛋白抑制HepG2细胞增殖能力差异分析 | 第78-80页 |
| 2. A/B/C/D四种不同基因型HBx蛋白促进HepG2细胞凋亡能力差异分析 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-87页 |
| 一、四种不同基因型HBx (A/B/C/D)型间差异分析 | 第82-83页 |
| 1. 四种不同基因型HBx(A/B/C/D)细胞模型的建立 | 第82页 |
| 2. 分析HBx蛋白诱导细胞凋亡的型间差异 | 第82-83页 |
| 二、HBx/Ca~(2+)/Bcl-2 (Bcl-xl)信号通路与细胞凋亡之间关系的探讨 | 第83-85页 |
| 三、HBx参与调节Ca~(2+)信号通路对病毒复制的影响及Ca~(2+)拮抗剂在HBV相关的肝病治疗中的探讨 | 第85-87页 |
| 第五章 小结与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
