| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 综述：沙门氏菌非编码小RNA研究进展 | 第11-25页 |
| 1 细菌非编码小RNA研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1 细菌非编码小RNA的发现 | 第11-12页 |
| 1.2 细菌非编码小RNA的特征与类型 | 第12页 |
| 1.3 细菌非编码小RNA的生物学功能 | 第12-13页 |
| 2 沙门氏菌非编码sRNA RyhB研究进展 | 第13-15页 |
| 2.1 沙门氏菌非编码sRNA RyhB-1与IsrE的发现与结构特点 | 第13页 |
| 2.2 RyhB-1与IsrE的作用机制 | 第13-14页 |
| 2.3 RyhB-1与1srE的生物学功能 | 第14-15页 |
| 2.3.1 RyhB-1与IsrE调控铁代谢 | 第14页 |
| 2.3.2 RyhB-1与IsrE调控细菌致病力 | 第14-15页 |
| 4 总结 | 第15-17页 |
| 参考文献 | 第17-25页 |
| 研究一 肠炎沙门氏菌50336 RyhB-1和IsrE在不同环境下表达量检测 | 第25-36页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| 1.1 菌株与细胞系 | 第26页 |
| 1.2 培养基和主要试剂 | 第26页 |
| 1.3 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-30页 |
| 2.2 RyhB-1与IsrE在不同培养条件和培养时期表达量检测 | 第27-30页 |
| 2.2.1 qRT-PCR各基因引物设计 | 第27页 |
| 2.2.2 HD-11细胞培养与传代 | 第27页 |
| 2.2.3 Trizol法提取RNA | 第27-28页 |
| 2.2.4 cDNA制备 | 第28页 |
| 2.2.5 qRT-PCR反应 | 第28-29页 |
| 2.2.6 RyhB-1与IsrE在铁匮乏时对数期和稳定期的表达量检测 | 第29页 |
| 2.2.7 RyhB-1与IsrE在模拟肠道环境下对数期和稳定期的表达量检测 | 第29页 |
| 2.2.8 RyhB-1与IsrE在感染鸡源巨噬细胞后表达量检测 | 第29-30页 |
| 3 结果 | 第30-33页 |
| 3.1 RyhB-1与IsrE在铁匮乏时对数期和稳定期的表达量检测 | 第30-31页 |
| 3.2 RyhB-1与IsrE在模拟肠道环境下对数期和稳定期的表达量检测 | 第31-32页 |
| 3.3 RyhB-1与IsrE感染巨噬细胞HD-11后表达量检测 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-36页 |
| 研究二 肠炎沙门氏菌50336 RyhB-1与IsrE双缺失突变株及相应回补株的构建 | 第36-49页 |
| 1 材料 | 第37-38页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第37页 |
| 1.2 培养基和主要试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要仪器 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-44页 |
| 2.1 肠炎沙门氏菌RyhB-1与IsrE双缺失突变株50336△ryhB-1/△isrE的构建 | 第38-42页 |
| 2.1.1 PCR引物设计 | 第38页 |
| 2.1.2 带氯霉素抗性基因的PCR产物制备与纯化 | 第38-39页 |
| 2.1.3 感受态细胞的制备以及pKD46的转化 | 第39页 |
| 2.1.4 Red重组酶诱导和带氯霉素抗性PCR产物片段的电转化 | 第39-40页 |
| 2.1.5 质粒pKD46消除 | 第40页 |
| 2.1.6 一次同源重组菌50336△ryhB-1/△isrE：：cat的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 2.1.7 FLP位点专一性重组 | 第41页 |
| 2.1.8 二次同源重组菌50336△ryhB-1/△isrE的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2 回补株50336△ryhB-1/pryhB-1和50336△ryhB-1/△isrE/pryhB-1/pisrE的构建 | 第42-44页 |
| 2.2.1 回补片段PCR产物制备 | 第42页 |
| 2.2.2 载体质粒pACYC184、质粒pBR322与PCR产物双酶切 | 第42-43页 |
| 2.2.3 酶切产物连接与鉴定 | 第43页 |
| 2.2.4 重组质粒电转化与回补株的构建 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-46页 |
| 3.1 带氯霉素抗性基因PCR产物鉴定 | 第44页 |
| 3.2 一次同源重组菌50336△ryhB-1/△isrE：：cat与二次同源重组菌50336△ryhB-1/△isrE鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3 双缺失株50336△ryhB-1/△isrE序列分析鉴定 | 第45-46页 |
| 3.4 回补株50336△ryhB-1/pryhB-1和50336△ryhB-1/△isrE/pryhB-1/pisrE鉴定 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 研究三 体内外实验分析肠炎沙门氏菌50336 RyhB-1和IsrE在致病性方面的作用 | 第49-74页 |
| 1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1 菌株、细胞系与实验动物 | 第50页 |
| 1.2 培养基和主要试剂 | 第50-51页 |
| 1.3 主要仪器 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-56页 |
| 2.1 RyhB-1与IsrE相关各菌株生长曲线测定 | 第51页 |
| 2.2 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌运动能力的影响 | 第51-52页 |
| 2.2.1 半固体运动性实验 | 第51页 |
| 2.2.2 RyhB-1与IsrE对运动性相关基因的qRT-PCR反应 | 第51-52页 |
| 2.3 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌生物膜形成能力的影响 | 第52-53页 |
| 2.3.1 结晶紫染色法定性测定野生株、缺失株与回补株的生物膜形成能力 | 第52页 |
| 2.3.2 结晶紫染色法定量测定野生株、缺失株与回补株的生物膜形成能力 | 第52-53页 |
| 2.4 RyhB-1与IsrE对肠上皮细胞Caco-2侵袭力的影响 | 第53页 |
| 2.5 RyhB-1与IsrE对肠上皮细胞Caco-2黏附力的影响 | 第53-54页 |
| 2.6 RyhB-1与IsrE对鸡源巨噬细胞HD-11抗吞噬力测定 | 第54-55页 |
| 2.7 RyhB-1与IsrE在鸡源巨噬细胞HD-11内存活率测定 | 第55页 |
| 2.8 RyhB-1 and IsrE对易感动物毒力的影响 | 第55-56页 |
| 2.8.1 对一日龄雏鸡攻毒后LD50和死亡率测定 | 第55-56页 |
| 2.8.2 临床变化以及病理解剖变化 | 第56页 |
| 2.8.3 攻毒组雏鸡体内细菌的分离与鉴定 | 第56页 |
| 2.8.4 攻毒组雏鸡体内细菌分布检测 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-71页 |
| 3.1 生长曲线测定结果 | 第56-58页 |
| 3.2 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌运动能力的影响 | 第58-61页 |
| 3.2.1 半固体运动性试验结果 | 第58-59页 |
| 3.2.2 与运动性相关的基因qRT-PCR结果 | 第59-61页 |
| 3.3 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌生物膜形成能力的影响 | 第61-62页 |
| 3.3.1 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌生物膜形成定性分析结果 | 第61页 |
| 3.3.2 RyhB-1与IsrE对肠炎沙门氏菌生物膜形成定量分析结果 | 第61-62页 |
| 3.4 肠上皮细胞Caco-2侵袭实验结果 | 第62-63页 |
| 3.5 肠上皮细胞Caco-2黏附实验结果 | 第63-66页 |
| 3.6 RyhB-1与IsrE突变株对鸡源巨噬细胞的抗吞噬力及其在巨噬细胞内细菌存活率的测定 | 第66-68页 |
| 3.7 RyhB-1与IsrE对易感动物毒力的影响 | 第68-71页 |
| 3.7.1 一日龄雏鸡攻毒LD50与死亡率测定结果 | 第68-69页 |
| 3.7.2 临床变化以及病理解剖变化 | 第69页 |
| 3.7.3 攻毒组雏鸡体内细菌分离与鉴定结果 | 第69-70页 |
| 3.7.4 攻毒组雏鸡体内细菌分布情况 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 全文小结 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
