| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 miRNA的发现 | 第14页 |
| 1.2 miRNAs的合成过程和作用机制 | 第14-16页 |
| 1.2.1 植物miRNAs的合成过程 | 第14-15页 |
| 1.2.2 植物miRNAs的作用机制 | 第15-16页 |
| 1.3 植物miRNAs的功能 | 第16-20页 |
| 1.3.1 miRNAs对植物生长发育的影响 | 第16-18页 |
| 1.3.1.1 miRNAs在根发育中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.1.2 miRNAs在叶发育中的作用 | 第17-18页 |
| 1.3.1.3 miRNAs在花发育中的作用 | 第18页 |
| 1.3.2 miRNAs对植物应答逆境胁迫的影响 | 第18-20页 |
| 1.3.2.1 miRNAs对植物应答生物胁迫的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.2.2 miRNAs对植物应答非生物胁迫的影响 | 第19-20页 |
| 1.4 植物miR393的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.5 tasiRNA合成作用级联途径的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.5.1 tasiRNA的发现及合成过程 | 第21-22页 |
| 1.5.2 tasiRNA合成作用级联途径的功能研究 | 第22-24页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-51页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 载体与菌种 | 第25页 |
| 2.1.3 试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.5 引物 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-51页 |
| 2.2.1 桑树miR393靶基因的预测 | 第27页 |
| 2.2.2 桑树miR393切割靶基因产生tasiRNAs的验证 | 第27-35页 |
| 2.2.2.1 mRNA杂交 | 第27-32页 |
| 2.2.2.2 sRNA杂交 | 第32-35页 |
| 2.2.3 MulMIR393A以及MulMIR393B基因启动子的克隆 | 第35-38页 |
| 2.2.3.1 桑树叶片DNA的提取 | 第35页 |
| 2.2.3.2 MulMIR393A以及MulMIR393B基因的启动子扩增 | 第35-36页 |
| 2.2.3.3 目的片段的回收 | 第36页 |
| 2.2.3.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第36-37页 |
| 2.2.3.5 目的片段与克隆载体的连接、转化 | 第37页 |
| 2.2.3.6 序列测定 | 第37-38页 |
| 2.2.4 pMulMIR393A和pMulMIR393B植物表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.2.4.1 小量法提取质粒 | 第38页 |
| 2.2.4.2 质粒的酶切和目的片段回收 | 第38-39页 |
| 2.2.4.3 pBI121-pMulMIR393A-GUS和pBI121-pMulMIR393B-GUS植物表达载体构建 | 第39-40页 |
| 2.2.5 转pMulMIR393A和转pMulMIR393B拟南芥的获得 | 第40-43页 |
| 2.2.5.1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.2.5.2 农杆菌GV3101感受态细胞的转化 | 第40-41页 |
| 2.2.5.3 拟南芥的培养 | 第41页 |
| 2.2.5.4 拟南芥的侵染与筛选鉴定 | 第41页 |
| 2.2.5.5 pMulMIR393A和pMulMIR393B基因组织表达特性分析 | 第41-42页 |
| 2.2.5.6 转pMulMIR393A和pMulMIR393B拟南芥诱导表达特性分析 | 第42-43页 |
| 2.2.6 转MulMIR393A和转MulMIR393B拟南芥的获得与鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.7 转基因拟南芥中MulMIR393A和MulMIR393B的表达分析 | 第44-46页 |
| 2.2.7.1 Trizol法提取拟南芥总RNA | 第44页 |
| 2.2.7.2 mRNA的Northern杂交 | 第44-45页 |
| 2.2.7.3 miRNA的反转录 | 第45页 |
| 2.2.7.4 miRNAs的荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 2.2.8 转MulMIR393A和MulMIR393B拟南芥中MulAFB2同源靶基因的表达检测 | 第46-48页 |
| 2.2.8.1 拟南芥叶片总RNA和sRNA的提取 | 第46页 |
| 2.2.8.2 转基因拟南芥中AFB2基因的Northern杂交 | 第46-47页 |
| 2.2.8.3 mRNA的反转录 | 第47页 |
| 2.2.8.4 mRNA的荧光定量PCR | 第47页 |
| 2.2.8.5 转MulMIR393A和转MulMIR393B拟南芥中siR140942同源基因的表达检测 | 第47-48页 |
| 2.2.9 桑树MulMIR393A和MulMIR393B基因的生物学功能分析 | 第48页 |
| 2.2.9.1 Pst DC3000接种拟南芥 | 第48页 |
| 2.2.9.2 Pst DC3000的CFU值测定 | 第48页 |
| 2.2.9.3 O2- 和H2O2染色 | 第48页 |
| 2.2.10 MulAFB2的克隆及植物表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.11 转MulAFB2基因拟南芥的获得与鉴定 | 第50页 |
| 2.2.12 MulAFB2在转MulAFB2拟南芥中的表达分析 | 第50页 |
| 2.2.13 桑树MulAFB2基因的生物学功能分析 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-73页 |
| 3.1 桑树miR393可以靶向切割MulAFB2基因产生tasiRNAs | 第51-52页 |
| 3.1.1 桑树miR393可以靶向MulAFB2 | 第51页 |
| 3.1.2 mul-miR393可以切割MulAFB2基因产生tasiRNAs | 第51-52页 |
| 3.2 MulMIR393A和MulMIR393B具有不同的表达特性 | 第52-60页 |
| 3.2.1 MulMIR393A和MulMIR393B启动子的克隆及信息分析 | 第52-58页 |
| 3.2.2 pMulMIR393A和pMulMIR393B具有不同的组织表达特性 | 第58-59页 |
| 3.2.2.1 pMulMIR393A和pMulMIR393B植物表达载体的构建 | 第58页 |
| 3.2.2.2 pMulMIR393A和pMulMIR393B组织表达特异性分析 | 第58-59页 |
| 3.2.3 pMulMIR393A和pMulMIR393B具有不同的诱导表达活性 | 第59-60页 |
| 3.3 MulMIR393A和MulMIR393B具有不同的生物功能 | 第60-66页 |
| 3.3.1 转MulMIR393A和MulMIR393B基因拟南芥的获得 | 第60-61页 |
| 3.3.2 转基因拟南芥中MulMIR393A和MulMIR393B的表达分析 | 第61-62页 |
| 3.3.2.1 MulMIR393A和MulMIR393B可在转基因拟南芥中表达 | 第61页 |
| 3.3.2.2 MulMIR393A和MulMIR393B可在转基因拟南芥中加工形成成熟体 | 第61-62页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥中mul-miR393-5p可以靶向MulAFB2的同源基因AthAFB2 | 第62-64页 |
| 3.3.4 MulMIR393A和MulMIR393B基因的生物学功能分析 | 第64-66页 |
| 3.3.4.1 转MulMIR393A和MulMIR393B基因拟南芥的表型分析 | 第64-65页 |
| 3.3.4.2 转MulMIR393A和MulMIR393B基因拟南芥对Pst DC3000的抗性分析 | 第65-66页 |
| 3.4 MulAFB2基因的功能分析 | 第66-73页 |
| 3.4.1 MulAFB2基因的克隆及生物信息学分析 | 第66-69页 |
| 3.4.2 MulAFB2基因植物表达载体的构建 | 第69-70页 |
| 3.4.3 转MulAFB2拟南芥的筛选鉴定 | 第70-71页 |
| 3.4.4 MulAFB2的生物学功能 | 第71-73页 |
| 3.4.4.1 转MulAFB2基因拟南芥的表型分析 | 第71-72页 |
| 3.4.4.2 MulAFB2基因对转基因拟南芥抗Pst DC3000能力的影响 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-77页 |
| 4.1 MulMIR393A和MulMIR393B具有不同的表达特性和生物学功能 | 第73-75页 |
| 4.1.1 MulMIR393A和MulMIR393B具有不同的表达特性 | 第73-75页 |
| 4.1.2 MulMIR393A和MulMIR393B具有不同的生物功能 | 第75页 |
| 4.2 miR393-5p介导的miR393-MulAFB2-tasiRNA-target genes作用级联 | 第75-77页 |
| 5 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第86页 |
