| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-23页 |
| 1.1 转录因子 | 第13-14页 |
| 1.2 WRKY转录因子的起源与进化 | 第14-15页 |
| 1.3 WRKY转录因子的结构特点 | 第15-17页 |
| 1.4 WRKY转录因子的分类 | 第17页 |
| 1.5 WRKY转录因子的生物学功能 | 第17-22页 |
| 1.5.1 WRKY转录因子与非生物胁迫 | 第18-20页 |
| 1.5.2 WRKY转录因子与生物胁迫 | 第20-22页 |
| 1.5.3 WRKY转录因子与活性氧 | 第22页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第23页 |
| 2.1.3 其他材料 | 第23页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-44页 |
| 2.2.1 棉花材料的培养及处理 | 第25-26页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取 | 第26-28页 |
| 2.2.2.1 CTAB法提取棉花植株总RNA | 第26-27页 |
| 2.2.2.2 利用试剂盒法快速提取棉花总RNA | 第27页 |
| 2.2.2.3 利用Trizol Kit提取烟草总RNA | 第27-28页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| 2.2.4 cDNA的纯化和加尾反应 | 第28-29页 |
| 2.2.4.1 cDNA的纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 cDNA 5′末端加尾反应 | 第29页 |
| 2.2.5 GhWRKY27a全长cDNA序列的获得 | 第29-32页 |
| 2.2.5.1 GhWRKY27a中间片段的获得 | 第29-30页 |
| 2.2.5.2 5'RACE获得 5'端序列 | 第30-31页 |
| 2.2.5.3 3'RACE获得 3'端序列 | 第31-32页 |
| 2.2.5.4 cDNA全长序列的获得 | 第32页 |
| 2.2.6 植物基因组DNA的提取和纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 GhWRKY27a全长基因组序列的获取 | 第33-34页 |
| 2.2.8 GhWRKY27a启动子序列的获得 | 第34页 |
| 2.2.9 目的片段的回收 | 第34-35页 |
| 2.2.10 目的片段与克隆载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌超级感受态细胞的制备和转化 | 第35-36页 |
| 2.2.11.1 Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.2.11.2 大肠杆菌超级感受态细胞DH5α的转化 | 第36页 |
| 2.2.12 大肠杆菌质粒的提取 | 第36页 |
| 2.2.13 重组质粒的酶切验证 | 第36-37页 |
| 2.2.14 实时荧光定量PCR检测目的基因的表达量 | 第37-38页 |
| 2.2.15 植物表达载体的构建与转化 | 第38-39页 |
| 2.2.15.1 植物表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.2.15.2 制备农杆菌感受态细胞 | 第38-39页 |
| 2.2.15.3 农杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| 2.2.15.4 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第39页 |
| 2.2.16 棉花VIGS沉默植株的获得 | 第39-40页 |
| 2.2.17 GhWRKY27a超表达植株的获得 | 第40-41页 |
| 2.2.17.1 农杆菌介导的叶盘法转化本生烟 | 第40页 |
| 2.2.17.2 小量法提取烟草植株基因组DNA | 第40-41页 |
| 2.2.17.3 转基因烟草植株的鉴定 | 第41页 |
| 2.2.18 转基因烟草渗透胁迫下的萌发率和根长测定 | 第41页 |
| 2.2.19 干旱实验 | 第41页 |
| 2.2.20 叶片失水率测定 | 第41-42页 |
| 2.2.21 气孔开度测定 | 第42页 |
| 2.2.22 ABA浓度测定 | 第42页 |
| 2.2.23 氧化胁迫实验 | 第42页 |
| 2.2.24 转基因植株的抗病分析 | 第42-43页 |
| 2.2.24.1 PDA培养基的配制 | 第42页 |
| 2.2.24.2 病原菌的活化 | 第42页 |
| 2.2.24.3 病原菌的离体接种 | 第42-43页 |
| 2.2.24.4 病原菌的活体接种 | 第43页 |
| 2.2.25 组织化学染色分析 | 第43页 |
| 2.2.25.1 3, 3'-二氨基联苯胺（3, 3'-diaminobenzidine, DAB）染色 | 第43页 |
| 2.2.25.2 氮蓝四唑（nitroblue tetrazolium, NBT）染色 | 第43页 |
| 2.2.26 网络信息资源 | 第43页 |
| 2.2.27 生物学软件 | 第43-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-67页 |
| 3.1 棉花GhWRKY27a基因的分离 | 第44-48页 |
| 3.1.1 GhWRKY27a中间片段的分离 | 第44页 |
| 3.1.2 GhWRKY27a 5'片段和 3'片段的分离 | 第44-45页 |
| 3.1.3 GhWRKY27a全长cDNA序列的分离 | 第45-46页 |
| 3.1.4 GhWRKY27a全长cDNA序列分析 | 第46页 |
| 3.1.5 GhWRKY27a氨基酸序列分析及其进化分析 | 第46-48页 |
| 3.2 GhWRKY27a基因组序列的分离及分析 | 第48-49页 |
| 3.3 棉花GhWRKY27a的亚细胞定位分析 | 第49-50页 |
| 3.4 GhWRKY27a启动子序列的分离及其顺式作用元件的预测 | 第50-51页 |
| 3.5 GhWRKY27a的表达模式分析 | 第51-54页 |
| 3.5.1 GhWRKY27a的组织特异性分析 | 第51-52页 |
| 3.5.2 GhWRKY27a在非生物胁迫下的表达模式 | 第52页 |
| 3.5.3 GhWRKY27a在生物胁迫下的表达特性分析 | 第52页 |
| 3.5.4 GhWRKY27a在多种信号分子处理下的表达模式 | 第52-54页 |
| 3.6 GhWRKY27a沉默植株的获得及鉴定 | 第54-55页 |
| 3.6.1 GhWRKY27a沉默载体的构建 | 第54页 |
| 3.6.2 GhWRKY27a沉默植株的获得 | 第54-55页 |
| 3.7 棉花GhWRKY27a沉默植株对干旱胁迫的抗性分析 | 第55-56页 |
| 3.8 GhWRKY27a超表达植株的获得及鉴定 | 第56-58页 |
| 3.8.1 GhWRKY27a超表达植株的获得 | 第56页 |
| 3.8.2 GhWRKY27a超表达植株的鉴定 | 第56-58页 |
| 3.9 GhWRKY27a超表达植株对干旱胁迫的抗性分析 | 第58-64页 |
| 3.9.1 GhWRKY27a超表达植株对甘露醇引起的渗透胁迫的敏感性 | 第58-59页 |
| 3.9.2 GhWRKY27a超表达植株对干旱胁迫的敏感性 | 第59-61页 |
| 3.9.3 GhWRKY27a超表达植株对ABA不敏感 | 第61-62页 |
| 3.9.4 超表达GhWRKY27a降低了转基因植株的抗氧化能力 | 第62-64页 |
| 3.10 GhWRKY27a超表达植株对立枯丝核菌的抗性分析 | 第64-67页 |
| 3.10.1 GhWRKY27a超表达植株对立枯丝核菌侵染的敏感性 | 第64页 |
| 3.10.2 GhWRKY27a超表达植株在立枯丝核菌侵染下增加了活性氧的积累 | 第64-65页 |
| 3.10.3 GhWRKY27a超表达植株在立枯丝核菌侵染下抗性相关基因的表达水平 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 GhWRKY27a属于Ⅲ类WRKY转录因子 | 第67页 |
| 4.2 GhWRKY27a的亚细胞定位分析 | 第67-68页 |
| 4.3 GhWRKY27a的表达受多种逆境胁迫及信号分子的诱导 | 第68页 |
| 4.4 GhWRKY27a参与调控干旱胁迫反应 | 第68-69页 |
| 4.5 GhWRKY27a参与调控抗病信号转导途径 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第80页 |
