| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| ·前言 | 第10页 |
| ·聚酮类化合物 | 第10-20页 |
| ·蒽环类化合物 | 第11-14页 |
| ·金霉酸类化合物 | 第14-18页 |
| ·大环内酯类化合物 | 第18页 |
| ·烯二炔类化合物 | 第18-20页 |
| ·磷氮霉素类化合物 | 第20页 |
| ·聚酮合酶和非核糖体肽合成酶的应用 | 第20页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 基于PCR技术的Ⅰ型聚酮合酶和非核糖体肽合成酶产生菌的筛选 | 第22-35页 |
| ·前言 | 第22页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·主要溶液 | 第24页 |
| ·实验器材 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·菌种培养 | 第24-25页 |
| ·放线菌基因组DNA提取 | 第25页 |
| ·DNA片段凝胶回收与克隆,碱裂解法提取提取大肠杆菌质粒DNA | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·Ⅰ型聚酮合酶PKS产生菌的筛选 | 第26-27页 |
| ·非核糖体肽合成酶NRPS产生菌的筛选 | 第27-28页 |
| ·染色体步移(Genome walking) | 第28-29页 |
| ·阳性菌株抗肿瘤活性实验 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-33页 |
| ·Ⅰ型聚酮合酶PKS产生菌的筛选 | 第30页 |
| ·Ⅰ型聚酮合酶PKS阳性产生菌非核糖体多肽合成酶NRPS产生菌的筛选 | 第30-31页 |
| ·Ⅰ型聚酮合酶及非核糖体肽合成酶阳性菌株信息 | 第31-32页 |
| ·Ⅰ型聚酮酶和非核糖体肽合成酶阳性菌株抗肿瘤活性分析 | 第32-33页 |
| ·本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 两株阳性菌株1044和1128的初步分类鉴定 | 第35-44页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·材料 | 第35-38页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35-37页 |
| ·实验试剂 | 第37-38页 |
| ·主要溶液 | 第38页 |
| ·实验器材 | 第38页 |
| ·引物 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·培养特征观察 | 第38-39页 |
| ·生理生化特性 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增16S-rDNA | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-43页 |
| ·培养特征观察 | 第41页 |
| ·生理生化分析 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增16S-rDNA序列 | 第42页 |
| ·菌种鉴定总结 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 1044和1128菌株活性代谢产物的研究 | 第44-54页 |
| ·前言 | 第44页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44-45页 |
| ·实验器材 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·培养条件 | 第45-46页 |
| ·菌株1044代谢产物的研究 | 第46页 |
| ·菌株1128代谢产物的研究 | 第46-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-52页 |
| ·菌株1044代谢产物结构研究 | 第48-50页 |
| ·菌株1128代谢产物结构研究 | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第五章 1044菌株Ⅰ型聚酮合酶的阻断 | 第54-65页 |
| ·前言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·菌种与质粒 | 第54页 |
| ·实验试剂 | 第54-55页 |
| ·培养基 | 第55页 |
| ·主要溶液 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-59页 |
| ·1044菌株的培养 | 第56页 |
| ·1044Ⅰ型聚酮合酶基因重组质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·大肠杆菌ET12567电转化 | 第57-58页 |
| ·重组质粒向1044的结合转移 | 第58页 |
| ·1044菌株染色体的提取 | 第58页 |
| ·1044菌株阻断突变株的验证 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-63页 |
| ·利用插入失活的方法阻断11044 Ⅰ-PKS基因 | 第59-61页 |
| ·链霉菌1044 Ⅰ-PKS阻断突变株的验证 | 第61-63页 |
| ·本章小结 | 第63-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65页 |
| ·展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 硕士期间发表论文 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-88页 |
