| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-22页 |
| 第一章 产酶溶杆菌的研究进展 | 第12-20页 |
| 1 产酶溶杆菌(L.enzymogenes)的分类地位 | 第12-14页 |
| 2 产酶溶杆菌(L.enzymogenes)的生物学特征 | 第14-15页 |
| 3 产酶溶杆菌(L.enzymogenes)的生防功能与生防机理 | 第15-20页 |
| ·胞外水解酶 | 第16页 |
| ·次生代谢物 | 第16-19页 |
| ·诱导抗性 | 第19-20页 |
| 第二章 Ax21家族蛋白质 | 第20-22页 |
| 下篇 研究内容 | 第22-88页 |
| 第一章 产酶溶杆菌3个lsp基因的克隆与功能分析 | 第24-60页 |
| 摘要 | 第24页 |
| ABSTRACT | 第24-27页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·酶、抗生素、试剂盒和化学试剂 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-40页 |
| ·DNA操作方法和体系 | 第31-32页 |
| ·产酶溶杆菌lsp1、lsp2和lsp3基因克隆和序列分析 | 第32页 |
| ·产酶溶杆菌lsp基因单突变、双突变及三突变体的构建 | 第32-33页 |
| ·产酶溶杆菌OH11基因组DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第34页 |
| ·质粒的提取与酶切验证 | 第34-35页 |
| ·产酶溶杆菌OH11电转感受态的制备以突变体的筛选 | 第35-36页 |
| ·lsp1、lsp2和lsp3单突变、双突变和三突变体生长的测定 | 第36页 |
| ·互补菌株、相应突变体空载以及上下游关系突变株的构建 | 第36-37页 |
| ·野生型与衍生菌株对水稻纹枯的拮抗测定 | 第37页 |
| ·HSAF的提取和HPLC检测 | 第37-38页 |
| ·WAP-8294A2的提取和HPLC检测 | 第38-39页 |
| ·三种胞外酶检测 | 第39-40页 |
| ·野生型与衍生菌株surface motility的测定 | 第40页 |
| ·数据分析 | 第40页 |
| 3 结果分析 | 第40-50页 |
| ·产酶溶杆菌OH11中存在3个同源性Ax21蛋白质(Lsp1、Lsp2和Lsp3) | 第40-41页 |
| ·lsp单突变、双突变及三突变体的构建 | 第41-43页 |
| ·lsp单突变、双突变和三突变体生长的测定 | 第43-44页 |
| ·10%TSB上lsp单突变、双突变及三突变HSAF检测 | 第44页 |
| ·△lsp1、△lsp2和△lsp3互补、空载及上下游关系突变株的构建 | 第44-45页 |
| ·野生型、lsp1、lsp2和lsp3突变体、互补及空载HSAF检测 | 第45-47页 |
| ·野生型及衍生菌株对水稻纹枯的拮抗实验 | 第47-48页 |
| ·突变体菌株对胞外酶产量的影响 | 第48-49页 |
| ·野生型与衍生菌株surface motility的测定 | 第49页 |
| ·野生型、lsp突变体对马铃薯环腐的拮抗和WAP-8294A2的HPLC检测 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 第二章 产酶溶杆菌4个NRPS/PKS基因簇的功能研究 | 第60-88页 |
| 摘要 | 第60页 |
| ABSTRACT | 第60-62页 |
| 1. 实验材料 | 第62-69页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第62-63页 |
| ·引物设计 | 第63-64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·产酶溶杆菌pks、nrps基因克隆和序列分析 | 第64页 |
| ·产酶溶杆菌pks、nrps基因突变体构建和验证 | 第64页 |
| ·对真菌和卵菌的抑菌实验 | 第64-65页 |
| ·三种胞外裂解酶的检测 | 第65页 |
| ·WAP-8294A2萃取与检测 | 第65页 |
| ·HSAF的提取、HPLC检测 | 第65-66页 |
| ·生长曲线的测定 | 第66页 |
| ·菌落形态的观察 | 第66页 |
| ·WAP-8294A2合成关键基因表达量的实时定量PCR | 第66-69页 |
| 2 结果和分析 | 第69-80页 |
| ·产酶溶杆菌pks、nrps基因簇的确立 | 第69页 |
| ·pks、nrps基因敲除突变体的构建 | 第69-71页 |
| ·对马铃薯环腐病菌的拮抗实验 | 第71-72页 |
| ·野生型、A2856和△3685在10% TSB上生长的测定 | 第72页 |
| ·野生型、△2856、A3685和AWAP定性与定量检测以及WAP-8294A2合成关键基因2168的转录水平 | 第72-73页 |
| ·野生型与突变体三种胞外酶的检测 | 第73-74页 |
| ·野生型、突变体菌株与HSAF合成关键基因缺失APKS对水稻纹枯及瓜果腐霉的拮抗 | 第74-75页 |
| ·100%TSB上HSAF的检测以及100%TS A对水稻纹枯及瓜果腐霉的拮抗 | 第75-76页 |
| ·HSAF纯品检测对真菌拮抗 | 第76-77页 |
| ·野生型与突变菌株对酿酒酵母的拮抗 | 第77-78页 |
| ·野生型与突变菌株在10% TSA、5% TSA上的菌落形态 | 第78页 |
| ·5%TSB上生长曲线的测定 | 第78-79页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第79-80页 |
| 3 讨论 | 第80页 |
| 4 致谢 | 第80-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
