| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| ·低聚果糖 | 第9页 |
| ·果糖基转移酶的生产 | 第9-11页 |
| ·产酶微生物的筛选 | 第10页 |
| ·高产菌株的选育 | 第10页 |
| ·重组菌的构建 | 第10-11页 |
| ·酶的分离纯化 | 第11页 |
| ·果糖基转移酶的特性 | 第11-13页 |
| ·酶的序列及三级（3-D）结构 | 第11-12页 |
| ·酶的底物特异性与动力学参数 | 第12页 |
| ·酶的温度稳定性与pH稳定性 | 第12-13页 |
| ·酶的离子稳定性 | 第13页 |
| ·果糖基转移酶的修饰与分子改造 | 第13-14页 |
| ·酶的固定化 | 第13-14页 |
| ·酶定向进化 | 第14页 |
| ·立题背景与意义 | 第14页 |
| ·研究目的与内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-23页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要化学试剂及工具酶 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-23页 |
| ·DNA操作 | 第18页 |
| ·菌株培养 | 第18页 |
| ·A. niger来源酶液的制备 | 第18页 |
| ·A. niger基因组的提取 | 第18页 |
| ·A. niger基因组的 18S rRNA基因扩增 | 第18-19页 |
| ·果糖基转移酶基因克隆及质粒pPIC9K-fwt构建 | 第19页 |
| ·重组菌P. pastoris GS115-pPIC9K-fwt构建 | 第19页 |
| ·重组P. pastoris果糖基转移酶在摇瓶中发酵生产 | 第19页 |
| ·重组P. pastoris果糖基转移酶在 5-L发酵罐中发酵生产 | 第19-20页 |
| ·果糖基转移酶基因克隆及质粒pYX212-fwt构建 | 第20页 |
| ·重组菌S. cerevisiae W303-1A-pYX212-fwt构建 | 第20页 |
| ·重组S. cerevisiae果糖基转移酶发酵生产与制备 | 第20页 |
| ·酶活定义与测定方法 | 第20页 |
| ·果糖基转移酶纯化 | 第20页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第20页 |
| ·温度和pH对果糖基转移酶稳定性的影响 | 第20-21页 |
| ·酶的动力学常数测定 | 第21页 |
| ·金属离子对酶的影响 | 第21页 |
| ·低聚果糖的合成 | 第21页 |
| ·果糖基转移酶序列比对与 3-D结构模拟分析 | 第21页 |
| ·果糖基转移酶定点突变方法 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-45页 |
| ·果糖基转移酶产生菌株的筛选及产酶分析 | 第23-25页 |
| ·高转化率果糖基转移酶生产菌株筛选 | 第23-24页 |
| ·霉菌YZ59 菌株的培养与形态特征分析 | 第24页 |
| ·霉菌YZ59 菌株的遗传学鉴定与分析 | 第24-25页 |
| ·果糖基转移酶基因在P. pastoris中的异源表达与酶学性质分析 | 第25-32页 |
| ·A. niger YZ59 来源果糖基转移酶基因的克隆与分析 | 第25-26页 |
| ·重组质粒pPIC9K-fwt的构建 | 第26页 |
| ·重组质粒pPIC9K-fwt转化P. pastoris GS115 | 第26-27页 |
| ·重组P. pastoris 5-L发酵罐发酵产酶 | 第27-28页 |
| ·果糖基转移酶纯化与分析 | 第28页 |
| ·温度对果糖基转移酶酶活力和稳定性的影响 | 第28-29页 |
| ·pH对果糖基转移酶酶活力和稳定性的影响 | 第29页 |
| ·果糖基转移酶动力学参数测定分析 | 第29-30页 |
| ·金属离子对果糖基转移酶酶活力的影响 | 第30-31页 |
| ·低聚果糖的合成 | 第31-32页 |
| ·果糖基转移酶在S. cerevisiae中的异源表达与酶学性质分析 | 第32-37页 |
| ·果糖基转移酶基因的克隆及重组载体构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pYX212-fwt转化S. cerevisiae及产酶研究 | 第33-34页 |
| ·温度对果糖基转移酶的影响 | 第34-35页 |
| ·pH对果糖基转移酶的影响 | 第35页 |
| ·果糖基转移酶的动力学参数 | 第35-36页 |
| ·金属离子对果糖基转移酶的影响 | 第36-37页 |
| ·基于定点突变提高果糖基转移酶的热稳定性 | 第37-45页 |
| ·果糖基转移酶 3-D结构模拟构建与解析 | 第37页 |
| ·果糖基转移酶热稳定性关键氨基酸位点分析与确定 | 第37-38页 |
| ·果糖基转移酶定点突变与表达 | 第38-39页 |
| ·定点突变对果糖基转移酶最适反应温度的影响 | 第39页 |
| ·定点突变对果糖基转移酶热稳定性的影响 | 第39-41页 |
| ·Glu377Gly突变对果糖基转移酶最适反应pH及pH稳定性的影响 | 第41页 |
| ·Glu377Gly突变对果糖基转移酶动力学参数的影响 | 第41-43页 |
| ·金属离子对突变体Glu377Gly酶活力的影响 | 第43页 |
| ·突变体Glu377Gly合成低聚果糖 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-46页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
