| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 上篇 文献综述 | 第10-23页 |
| 第一章 香蕉概述 | 第10-11页 |
| 1. 香蕉的经济价值 | 第10页 |
| 2. 香蕉生长发育特点和对环境的要求 | 第10-11页 |
| 第二章 非生物胁迫相关机制研究进展 | 第11-12页 |
| 第三章 延长因子基因的国内外研究进展 | 第12-18页 |
| 1. 延长因子的分类及功能 | 第12页 |
| 2. 延长因子基因的研究进展 | 第12-16页 |
| ·延长因子eEF1A的克隆和鉴定 | 第12-13页 |
| ·延长因子eEF1A的生物学功能 | 第13-16页 |
| 3. 延长因子在蛋白质合成过程中的作用机制 | 第16-18页 |
| 第四章 基于酵母双杂交系统(yeast two-hybrid system)的蛋白互作研究 | 第18-22页 |
| 1. 酵母双杂交系统的原理和应用 | 第18-20页 |
| 2. 酵母双杂交系统的进展和局限 | 第20-22页 |
| 第五章 本研究的目的、意义和技术路线 | 第22-23页 |
| 1. 本研究的目的和意义 | 第22页 |
| 2. 技术路线 | 第22-23页 |
| 下篇 研究内容 | 第23-59页 |
| 第一章 材料、试剂和仪器 | 第23-24页 |
| 1. 材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌株 | 第23页 |
| 2. 实验试剂 | 第23页 |
| 3. 培养基 | 第23-24页 |
| 4. 实验仪器 | 第24页 |
| 第二章 实验方法 | 第24-37页 |
| 1. MuEF1A在香蕉不同器官中的表达分析 | 第24-27页 |
| ·材料处理 | 第24页 |
| ·香蕉不同器官中总RNA的提取 | 第24-26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| ·RT-PCR引物设计及检测 | 第26-27页 |
| ·荧光定量PCR反应体系及程序 | 第27页 |
| ·荧光定量PCR的定量方法 | 第27页 |
| 2. MuEF1A在采后香蕉果实中的差异表达分析 | 第27-28页 |
| ·材料处理 | 第27-28页 |
| ·不同时段的果实RNA提取 | 第28页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第28页 |
| ·荧光PCR检测香蕉果实基因差异表达 | 第28页 |
| 3. MaEF1A在香蕉幼苗中非生物胁迫处理下的差异表达分析 | 第28-29页 |
| ·香蕉幼苗材料的处理 | 第28-29页 |
| ·不同处理条件下RNA的提取 | 第29页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第29页 |
| ·荧光PCR检测不同处理条件下基因的差异表达 | 第29页 |
| 4. 植物表达载体(pCAMBIA1302-MaEF1A)的构建及转化 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第30页 |
| 5. 转基因拟南芥 | 第30-32页 |
| ·拟南芥的培养 | 第30页 |
| ·农杆菌介导的浸染花序法转化拟南芥 | 第30-31页 |
| ·T1代抗性筛选 | 第31页 |
| ·转基因拟南芥T2代培养 | 第31页 |
| ·MaEF1A转基因拟南芥的PCR检测 | 第31-32页 |
| 6. MaEF1A在拟南芥中异位表达后的功能分 | 第32页 |
| ·转MaEF1A拟南芥表型分析 | 第32页 |
| ·转基因MaEF1A拟南芥的高盐胁迫分析 | 第32页 |
| 7. 酵母双杂交研究与MaEF1A互作的蛋白质 | 第32-37页 |
| ·诱饵载体的构建 | 第32-33页 |
| ·诱饵蛋白的自激活检测及毒性检测 | 第33-34页 |
| ·香蕉cDNA文库的构建 | 第34-35页 |
| ·共转化 | 第35-36页 |
| ·转化子的筛选 | 第36页 |
| ·香蕉中筛选与MaEF1A互作的蛋白 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果 | 第37-54页 |
| 1. MaEF1A在香蕉各器官中的表达分析 | 第37页 |
| 2. MaEF1A在采后不同处理的香蕉果实中的差异表达分析 | 第37-38页 |
| 3. MaEF1A基因在香蕉苗非生物胁迫下的应答 | 第38-41页 |
| ·MaEF1A基因对香蕉苗低温胁迫的应答 | 第38-39页 |
| ·MaEF1A基因对香蕉苗淹水胁迫的应答 | 第39页 |
| ·MaEF1A基因对香蕉苗伤害胁迫的应答 | 第39-40页 |
| ·MaEF1A基因对香蕉苗盐胁迫的应答 | 第40-41页 |
| 4. 植物表达载体pCAMBIA1302-MaEF1A的构建 | 第41-42页 |
| 5. MaEF1A转基因株系的PCR检测 | 第42页 |
| 6. 转MaEF1A拟南芥的表型分析 | 第42-48页 |
| ·转MaEF1A拟南芥种子萌发幼苗生长情况分析 | 第42-43页 |
| ·转MaEF1A拟南芥植株生长发育情况分析 | 第43-44页 |
| ·转MaEF1A拟南芥长势分析 | 第44-48页 |
| 7. 转基因拟南芥高浓度NaCl的响应 | 第48-50页 |
| 8. 酵母双杂交研究与MaEF1A互作的蛋白质 | 第50-54页 |
| ·pGBKT7-MaEF1A载体的构建和检测 | 第50-51页 |
| ·香蕉cDNA文库的构建 | 第51-52页 |
| ·共转化后酵母阳性克隆的筛选 | 第52-53页 |
| ·初筛蓝色克隆序列分析 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
