山羊耳尖成纤维细胞重编程为多能干细胞的研究
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 iPS细胞系的制备方法 | 第12-17页 |
| ·转录因子的选择 | 第13-15页 |
| ·Oct4 | 第13-14页 |
| ·Sox2 | 第14页 |
| ·Klf4 | 第14页 |
| ·c-Myc | 第14页 |
| ·Lin28 | 第14页 |
| ·Nanog | 第14-15页 |
| ·hTert | 第15页 |
| ·SV40大T抗原 | 第15页 |
| ·基因导入方式 | 第15-16页 |
| ·靶细胞的选择 | 第16-17页 |
| ·iPS细胞的培养条件 | 第17页 |
| ·iPS克隆的识别和鉴定 | 第17页 |
| 2 iPS细胞的临床应用前景 | 第17-18页 |
| 3 研究的目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-40页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·载体和菌株 | 第20页 |
| ·试剂及其配置 | 第20-22页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-40页 |
| ·质粒获取 | 第22-24页 |
| ·质粒回收 | 第22-23页 |
| ·质粒转化 | 第23页 |
| ·质粒提取 | 第23-24页 |
| ·质粒双酶切鉴定 | 第24页 |
| ·细胞分离培养 | 第24-27页 |
| ·MEF分离培养 | 第24-26页 |
| ·GEF分离培养 | 第26-27页 |
| ·慢病毒包装 | 第27-28页 |
| ·准备包装细胞 | 第27-28页 |
| ·转染 | 第28页 |
| ·收集病毒 | 第28页 |
| ·病毒滴度测定 | 第28-29页 |
| ·饲养层细胞制备 | 第29页 |
| ·山羊iPS细胞的建立 | 第29-32页 |
| ·慢病毒感染GEF | 第29-30页 |
| ·iPS克隆挑选 | 第30页 |
| ·iPS克隆的传代扩增 | 第30-31页 |
| ·山羊iPS细胞冻存 | 第31页 |
| ·山羊iPS细胞复苏 | 第31-32页 |
| ·山羊iPS细胞生物学特性检测 | 第32-40页 |
| ·形态学鉴定 | 第32页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第32页 |
| ·细胞内ES细胞标志性基因表达的检测 | 第32-34页 |
| ·免疫荧光染色 | 第34-35页 |
| ·山羊iPS表观遗传特征分析 | 第35-38页 |
| ·体外分化能力检测 | 第38-39页 |
| ·畸胎瘤形成与体内分化能力测定 | 第39-40页 |
| 第三章 结果与分析 | 第40-55页 |
| 1 慢病毒载体鉴定 | 第40-42页 |
| ·质粒提取 | 第40页 |
| ·酶切鉴定 | 第40-42页 |
| 2 GEF和MEF分离培养及饲养层的制作 | 第42-43页 |
| ·GEF分离培养 | 第42页 |
| ·MEF分离培养 | 第42-43页 |
| 3 慢病毒包装 | 第43-45页 |
| ·plentG-KOSM | 第43-44页 |
| ·可诱导慢病毒系统 | 第44-45页 |
| 4 山羊iPS细胞的获得 | 第45-47页 |
| ·plentG-KOSM | 第45-46页 |
| ·可诱导慢病毒系统 | 第46-47页 |
| 5 AP染色 | 第47页 |
| 6 ES细胞标志性基因表达的检测 | 第47-48页 |
| 7 免疫荧光染色 | 第48-49页 |
| 8 表观遗传状态鉴定 | 第49-50页 |
| 9 体外分化 | 第50-52页 |
| 10 畸胎瘤实验 | 第52-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-61页 |
| 1 慢病毒载体的选择 | 第55-57页 |
| 2 GEF和MEF的分离培养 | 第57-58页 |
| 3 慢病毒包装 | 第58页 |
| 4 山羊iPS细胞的获得 | 第58-59页 |
| 5 ES细胞标志性物 | 第59页 |
| 6 表观遗传状态鉴定 | 第59-60页 |
| 7 体内外分化能力 | 第60-61页 |
| 第五章 小结 | 第61-62页 |
| 在读期间发表论文 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
