| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-27页 |
| ·GCRV研究现状 | 第11-18页 |
| ·GCRV的形态结构 | 第11-12页 |
| ·GCRV的理化特性 | 第12页 |
| ·基因及编码蛋白 | 第12-14页 |
| ·GCRV的致病机制 | 第14-15页 |
| ·GCRV对宿主细胞生理功能的影响 | 第15页 |
| ·GCRV病毒检测 | 第15-16页 |
| ·抗病毒措施 | 第16-18页 |
| ·LAMP扩增技术 | 第18-25页 |
| ·LAMP技术原理 | 第18-20页 |
| ·LAMP技术特点 | 第20-21页 |
| ·LAMP产物的检测 | 第21页 |
| ·LAMP技术在水生动物病害中的应用 | 第21-25页 |
| ·研究目的及意义 | 第25页 |
| ·研究内容及技术路线 | 第25-27页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·技术路线 | 第26-27页 |
| 2 实验材料 | 第27-29页 |
| ·病料及毒株 | 第27页 |
| ·实验所需主要试剂 | 第27页 |
| ·试验所需主要溶液及其配制 | 第27-29页 |
| ·RNA提取所用溶液 | 第27-28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化所用试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| 3 方法 | 第29-40页 |
| ·RT-PCR检测方法建立 | 第29-36页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·病料处理 | 第30页 |
| ·总RNA的提取 | 第30页 |
| ·反转录合成cDNA | 第30-31页 |
| ·PCR扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物的凝胶回收纯化 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的克隆与序列测定 | 第32-35页 |
| ·RT-PCR反应条件优化 | 第35-36页 |
| ·特异性检测 | 第36页 |
| ·敏感性检测 | 第36页 |
| ·RT-LAMP快速检测方法的建立 | 第36-39页 |
| ·引物设计方法 | 第36-37页 |
| ·RT-LAMP扩增反应 | 第37-38页 |
| ·RT-LAMP扩增产物的纯化及酶切鉴定 | 第38页 |
| ·RT-LAMP扩增反应体系及条件的优化 | 第38-39页 |
| ·RT-LAMP扩增方法敏感性的检测 | 第39页 |
| ·RT-LAMP扩增方法特异性检测 | 第39页 |
| ·实验样品检验 | 第39-40页 |
| 4 结果 | 第40-52页 |
| ·RT-PCR产物的克隆与序列测定 | 第40页 |
| ·RT-PCR扩增反应体系和条件优化结果 | 第40-44页 |
| ·RT-PCR反应体系中Tm的优化 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR反应体系中Mg~(2+)的优化 | 第41页 |
| ·RT-PCR反应体系中dNTPs的优化 | 第41-42页 |
| ·RT-PCR反应体系中引物浓度的优化 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR反应体系中Taq DNA聚合酶的优化 | 第43页 |
| ·优化反应条件和反应体系后建立的RT-PCR检测方法 | 第43-44页 |
| ·CGRV RT-LAMP检测方法建立及反应条件优化结果 | 第44-50页 |
| ·RT-LAMP反应体系中反应时间的优化 | 第44-45页 |
| ·RT-LAMP反应体系中反应温度的优化 | 第45-46页 |
| ·RT-LAMP反应体系中Mg~(2+)浓度的优化 | 第46页 |
| ·RT-LAMP反应体系中dNTPs浓度的优化 | 第46-47页 |
| ·RT-LAMP反应体系中内外引物浓度和比例的优化 | 第47-48页 |
| ·RT-LAMP反应体系中Bst DNA聚合酶浓度的优化 | 第48-49页 |
| ·优化反应条件和反应体系后建立的LAMP检测方法 | 第49-50页 |
| ·RT-LAMP与RT-PCR方法检测CGRV特异性比较 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR和RT-LAMP检测CGRV敏感性比较 | 第51-52页 |
| ·试验样品检验结果 | 第52页 |
| 5 讨论 | 第52-57页 |
| ·RNA提取 | 第52-53页 |
| ·RT-LAMP反应体系的分析 | 第53-55页 |
| ·LAMP引物的确定 | 第53-54页 |
| ·Bst DNA聚合酶对LAMP反应的影响 | 第54页 |
| ·Mg~(2+)浓度对LAMP反应的影响 | 第54-55页 |
| ·温度对LAMP反应的影响 | 第55页 |
| ·关于试验样品处理结果 | 第55页 |
| ·RT-PCR和RT-LAMP检测方法建立比较 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
