| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 符号说明 | 第8-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 前言 | 第13页 |
| 1. 草鱼呼肠孤病毒的研究进展 | 第13-17页 |
| ·草鱼呼肠孤病毒研究概况 | 第13-14页 |
| ·GCRV的形态结构 | 第14-15页 |
| ·GCRV基因组结构和功能分析 | 第15页 |
| ·GCRV理化性质与培养特性研究 | 第15-16页 |
| ·病理组织学研究 | 第16-17页 |
| ·免疫原性研究 | 第17页 |
| 2 草鱼呼肠孤病毒检测方法研究进展 | 第17-19页 |
| ·草鱼出血病临床诊断 | 第17-18页 |
| ·GCRV的实验室检测 | 第18-19页 |
| 3 草鱼出血病的防治 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 南方草鱼呼肠孤病毒流行病学调查 | 第21-46页 |
| 1. 材料和方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·实验材料、试剂和试剂盒 | 第21页 |
| ·所用溶剂及其器具 | 第21-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22-23页 |
| ·样品采集及处理 | 第23页 |
| ·引物设计与合成 | 第23-24页 |
| ·病毒的分离与传代培养 | 第24-28页 |
| ·草鱼出血病病料检测 | 第24-28页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第24页 |
| ·病毒RNA反转录 | 第24-25页 |
| ·反转录产物PCR | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取 | 第27页 |
| ·重组质粒的测序 | 第27-28页 |
| ·病鱼组织匀浆除菌上清液的制备 | 第28页 |
| ·病毒分离培养 | 第28页 |
| ·病毒的鉴定 | 第28-29页 |
| ·电镜观察 | 第28-29页 |
| ·病毒基因组的SDS-PAGE | 第29页 |
| ·草鱼感染试验 | 第29页 |
| ·草鱼的驯养 | 第29页 |
| ·病毒回归草鱼试验 | 第29页 |
| ·病毒VP6蛋白基因变异分析 | 第29-30页 |
| ·目的基因的RT-PCR扩增 | 第29页 |
| ·克隆与测序 | 第29-30页 |
| ·序列比对及分析 | 第30页 |
| ·GCRV的抗原保护性初步研究 | 第30-31页 |
| ·单抗血清的获得 | 第30页 |
| ·对流免疫电泳试验 | 第30-31页 |
| ·草鱼保护实验 | 第31页 |
| 2. 结果与分析 | 第31-43页 |
| ·流行病学调查结果 | 第31-33页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第33-34页 |
| ·病毒分离培养结果 | 第34-36页 |
| ·新型GCRV的电镜观察 | 第36-37页 |
| ·病毒基因组SDS-PAGE结果 | 第37-38页 |
| ·草鱼回归感染试验结果 | 第38-39页 |
| ·序列分析和比对 | 第39-40页 |
| ·系统进化树 | 第40-41页 |
| ·VP6蛋白抗原表位 | 第41-42页 |
| ·对流免疫电泳与草鱼保护试验 | 第42-43页 |
| 3. 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 GCRV双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第46-59页 |
| 1. 材料和方法 | 第46-49页 |
| ·病毒、细胞与临床样品 | 第46页 |
| ·试剂与仪器 | 第46页 |
| ·引物的设计与筛选 | 第46-47页 |
| ·阳性标准质粒的制备 | 第47页 |
| ·荧光定量PCR反应条件优化 | 第47-48页 |
| ·反应标准曲线的建立 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR检测方法的评价 | 第48-49页 |
| ·特异性试验 | 第48页 |
| ·敏感性试验 | 第48页 |
| ·重复性试验 | 第48-49页 |
| ·临床样品的检测 | 第49页 |
| 2. 结果与分析 | 第49-56页 |
| ·cDNA模板PCR扩增结果 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒拷贝数测定 | 第50页 |
| ·双重荧光定量PCR反应条件的确定及标准曲线的建立 | 第50-52页 |
| ·定量RT-PCR的熔解曲线 | 第52页 |
| ·特异性试验结果 | 第52-53页 |
| ·敏感性试验结果 | 第53-55页 |
| ·重复性试验结果 | 第55-56页 |
| ·临床样品的检测 | 第56页 |
| 3. 讨论 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69页 |