| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| ·蓝舌病概述 | 第12-18页 |
| ·BTV 病原学特征 | 第12-13页 |
| ·BTV 基因组结构与特征 | 第13页 |
| ·BTV 基因产物及其生物学功能 | 第13-16页 |
| ·BTV 的复制繁殖过程 | 第16-17页 |
| ·BTV 的流行病学特征 | 第17页 |
| ·BTV 的临床症状及病理变化 | 第17-18页 |
| ·BT 的诊断 | 第18页 |
| ·BT 的预防 | 第18页 |
| ·研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 第二章 BTV1 VP2、VP5 蛋白的原核表达和抗原性检测 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·病毒、细胞、菌株、质粒载体 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要培养基及溶液的配制 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-22页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·BTV1 病毒 RNA 的提取及反转录 | 第20页 |
| ·BTV1 L2 基因、M5 基因的扩增、鉴定 | 第20页 |
| ·VP2、VP5 蛋白原核表达载体的构建 | 第20-21页 |
| ·VP2、VP5 蛋白的原核表达以及 SDS-PAGE 分析 | 第21-22页 |
| ·Western blot 检测原核表达重组 VP2、VP5 蛋白 | 第22页 |
| ·原核表达重组 VP2、VP5 蛋白纯化 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-25页 |
| ·BTV1 L2 基因、M5 基因的 PCR 扩增 | 第22-23页 |
| ·重组质粒 pC4X-VP2、pC4X-VP5 的酶切鉴定和 PCR 鉴定 | 第23页 |
| ·重组 VP2、VP5 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第23-24页 |
| ·重组 VP2、VP5 蛋白的反应原性鉴定 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 BTV1 VP2、VP5 蛋白的真核表达和抗原性检测 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·菌株、细胞、质粒载体 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·培养基及溶液制备 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·BTV1 L2 基因、M5 基因的扩增、鉴定 | 第27-28页 |
| ·VP2、VP5 蛋白真核表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·L2 基因、M5 基因重组杆粒的制备、提取与鉴定 | 第29-30页 |
| ·昆虫细胞 Sf9 中重组杆状病毒的获得 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒 BACV-VP2、BACV-VP5 在 Sf9 细胞中的表达及 SDS-PAGE分析 | 第30页 |
| ·真核表达重组 VP2、VP5 蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·Western blot 检测真核表达重组 VP2 蛋白 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-34页 |
| ·L2、M5 基因的 PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·重组供体质粒 pFast-VP2、pFast-VP2 的鉴定 | 第32页 |
| ·重组杆粒 BAC-VP2 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·昆虫细胞 Sf9 中重组杆状病毒的产生 | 第33页 |
| ·真核系统表达 VP2、VP5 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析及纯化 | 第33-34页 |
| ·重组 VP2、VP5 蛋白的反应原性鉴定 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 BTV1 VP2、VP5 蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·病毒、细胞 | 第35页 |
| ·实验动物 | 第35页 |
| ·主要试剂、溶液 | 第35页 |
| ·主要溶液和培养液的配制 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-39页 |
| ·动物免疫 | 第35页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第35-36页 |
| ·细胞融合 | 第36-37页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第37页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养、冻存和复苏 | 第37-38页 |
| ·腹水的制备 | 第38页 |
| ·Mabs 特性的鉴定 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-42页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的确立 | 第39页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的筛选与获得 | 第39页 |
| ·Mabs 亚型鉴定 | 第39-40页 |
| ·Mabs 的 Western blot 鉴定 | 第40-41页 |
| ·Mabs 的 IFA 鉴定 | 第41-42页 |
| ·Mabs 中和活性测定 | 第42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第五章 BTV1 VP2、VP5 蛋白抗原表位鉴定 | 第44-65页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·质粒、菌株 | 第44页 |
| ·主要试剂及仪器设备 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-52页 |
| ·BTV1 VP2 蛋白抗原表位的鉴定 | 第44-49页 |
| ·BTV1 VP5 蛋白抗原表位的鉴定 | 第49-52页 |
| ·结果 | 第52-64页 |
| ·BTV1 VP2 蛋白抗原表位的鉴定 | 第52-59页 |
| ·BTV1 VP5 蛋白抗原表位的初步鉴定 | 第59-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第六章 全文结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
