| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的研究进展 | 第13-19页 |
| ·毕赤酵母表达菌株 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第14-16页 |
| ·表达载体的整合 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母外源蛋白的表达及其优化 | 第17-19页 |
| ·用于毕赤酵母表达系统中的启动子 | 第19-22页 |
| ·启动子 PAOX1 | 第20页 |
| ·启动子 PGAP | 第20-21页 |
| ·启动子 PFLD1 | 第21页 |
| ·启动子 PPEX8和 PYPT1 | 第21-22页 |
| ·启动子 PTEF1 | 第22页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B 的研究进展 | 第22-25页 |
| ·脂肪酶简介 | 第22-23页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第23-24页 |
| ·南极假丝酵母脂肪酶 B | 第24-25页 |
| ·本课题的研究意义及主要内容 | 第25-27页 |
| ·本课题的研究意义 | 第25页 |
| ·本课题研究的内容 | 第25-27页 |
| 第二章 启动子 PGCW14与 PAOX1、PGAP、PTEF1在毕赤酵母表面展示 CALB 中的应用及比较 | 第27-53页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料与设备 | 第27-31页 |
| ·菌种和质粒 | 第27-28页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第28页 |
| ·化学试剂 | 第28-29页 |
| ·溶液的配制 | 第29-30页 |
| ·培养基的配制 | 第30页 |
| ·主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| ·实验流程 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-44页 |
| ·菌体的培养和保存 | 第32页 |
| ·毕赤酵母基因组的提取 | 第32-33页 |
| ·毕赤酵母表面展示载体的构建 | 第33-40页 |
| ·重组毕赤酵母的构建与筛选 | 第40-42页 |
| ·重组毕赤酵母的摇瓶发酵 | 第42-43页 |
| ·CALB 酶活力检测 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-51页 |
| ·CALB 基因与壁蛋白基因 GCW14 的融合及表达载体的构建 | 第44-47页 |
| ·重组毕赤酵母菌株的构建和筛选 | 第47页 |
| ·五株 CALB 表面展示重组菌株的摇瓶发酵产酶分析 | 第47-51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 启动子 PGCW14的突变及作用元件分析 | 第53-73页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与设备 | 第53-55页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第53-54页 |
| ·化学试剂 | 第54页 |
| ·溶液的配制 | 第54页 |
| ·培养基的配制 | 第54页 |
| ·主要仪器和设备 | 第54-55页 |
| ·实验流程 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-64页 |
| ·启动子 PGCW14序列的 TESS 分析 | 第55页 |
| ·质粒 pGEL 的构建 | 第55-57页 |
| ·启动子 PGCW14定点突变重组质粒的构建 | 第57-60页 |
| ·启动子 PGCW14截短重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| ·启动子 PGCW14的随机突变 | 第61-62页 |
| ·重组毕赤酵母的构建和筛选 | 第62-63页 |
| ·随机突变酵母转化子的高通量筛选 | 第63-64页 |
| ·摇瓶发酵检测目标突变子的荧光强度 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-71页 |
| ·启动子 PGCW14的 TESS 分析 | 第64-65页 |
| ·重组质粒 pGEL 的构建 | 第65页 |
| ·启动子 TATAbox 和 CAAT box 突变对 PGCW14活力的影响 | 第65-66页 |
| ·启动子截短对 PGCW14活力的影响 | 第66-69页 |
| ·启动子 PGCW14的随机突变及高通量筛选 | 第69-70页 |
| ·突变位点的作用元件分析 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第四章 突变启动子 PGCW14-M20在毕赤酵母表达 CALB 中的应用 | 第73-82页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料与设备 | 第73-74页 |
| ·菌种和质粒 | 第73页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第73-74页 |
| ·化学试剂 | 第74页 |
| ·溶液的配制 | 第74页 |
| ·培养基的配制 | 第74页 |
| ·主要仪器和设备 | 第74页 |
| ·实验流程 | 第74-75页 |
| ·实验方法 | 第75-77页 |
| ·CALB 基因和 CALB-GCW14 基因的克隆 | 第75页 |
| ·以 PGCW14-M20为启动子的 CALB 表达载体的构建 | 第75-76页 |
| ·以 PGCW14为启动子的 CALB 表达载体的构建 | 第76-77页 |
| ·毕赤酵母的转化和筛选 | 第77页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵 | 第77页 |
| ·CALB 酶活力的检测 | 第77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-81页 |
| ·CALB 表达载体 pGCL-M20-sec、pGCL-M20-dis、pGCL -sec、pGCL-dis 的构建 | 第77-79页 |
| ·突变启动子 PGCW14-20应用于 CALB 重组表达的摇瓶发酵 | 第79-81页 |
| ·本章小结 | 第81-82页 |
| 结论与展望 | 第82-84页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 展望 | 第83页 |
| 本论文的创新点 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第92页 |
