| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·HIV-1人类免疫缺陷病毒研究进展 | 第11-12页 |
| ·形态与结构 | 第11页 |
| ·基因结构及编码蛋白的功能 | 第11页 |
| ·病毒复制及组装 | 第11-12页 |
| ·HIV与其他疾病 | 第12页 |
| ·肿瘤发病及治疗 | 第12-14页 |
| ·肿瘤研究现状 | 第12页 |
| ·肿瘤治疗 | 第12-13页 |
| ·肿瘤靶向性治疗 | 第13页 |
| ·hTERT启动子简介 | 第13-14页 |
| ·hTERT启动子转录机制 | 第14页 |
| ·细胞凋亡 | 第14-15页 |
| ·细胞周期调控 | 第15-19页 |
| ·细胞周期 cell cycle | 第15-16页 |
| ·细胞周期调控系统 | 第16页 |
| ·细胞周期蛋白 | 第16页 |
| ·细胞周期蛋白依赖激酶 | 第16-17页 |
| ·细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子CKI | 第17页 |
| ·细胞周期检查点 | 第17-18页 |
| ·生长因子与细胞增殖 | 第18页 |
| ·细胞周期与肿瘤 | 第18-19页 |
| ·TAT—反式转录因子结构及功能 | 第19-21页 |
| ·HIV-1 Tat蛋白的结构 | 第19-20页 |
| ·HIV-1 Tat的功能研究 | 第20-21页 |
| ·VPR-病毒蛋白R | 第21-24页 |
| ·HIV-1Vpr蛋白的结构 | 第21-22页 |
| ·HIV-1Vpr的功能研究 | 第22-24页 |
| ·热休克蛋白70与HIV | 第24-25页 |
| ·HSP70与VPR | 第24-25页 |
| ·研究目标、内容、创新点和意义 | 第25-26页 |
| ·研究目标 | 第25页 |
| ·研究内容 | 第25页 |
| ·研究创新点和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第26-38页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·细胞株 | 第26页 |
| ·实验试剂 | 第26-28页 |
| ·仪器与设备 | 第28-30页 |
| ·常用试剂配制 | 第30-33页 |
| ·常用实验方法 | 第33-38页 |
| ·灭菌 | 第33-34页 |
| ·细胞的传代 | 第34页 |
| ·细胞的复苏 | 第34页 |
| ·细胞冻存 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备及质粒转化 | 第35页 |
| ·细胞内RNA的提取 | 第35-36页 |
| ·Realtime PCR(SYBR(?)Premix Ex TaqTM Ⅱ(Perfect Real Time) | 第36页 |
| ·细胞中内总蛋白的提取 | 第36页 |
| ·Bradford比色法蛋白定量 | 第36-37页 |
| ·western blot实验 | 第37-38页 |
| 第三章 Vpr真核表达载体及绿色荧光蛋白载体构建 | 第38-45页 |
| ·实验目的 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-42页 |
| ·主要实验试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-42页 |
| ·实验结果 | 第42-43页 |
| ·HIV-1 Vpr PCR扩增反应 | 第42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·实验小结 | 第43-45页 |
| 第四章 细胞周期调控因子p21,cyclinD2,cyclinE,cyclinB1启动子荧光素酶报告基因质粒构建 | 第45-50页 |
| ·实验目的 | 第45页 |
| ·材料与方法 | 第45-48页 |
| ·主要实验试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-48页 |
| ·实验结果 | 第48-49页 |
| ·PCR扩增反应 | 第48页 |
| ·荧光素酶报告基因载体的构建 | 第48-49页 |
| ·实验小结 | 第49-50页 |
| 第五章 hTERT人端粒酶逆转录酶启动子核心序列荧光素酶报告基因载体构建 | 第50-54页 |
| ·实验目的 | 第50页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·主要实验试剂 | 第50页 |
| ·主要实验仪器 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·pGL3-Basic双酶切反应 | 第51页 |
| ·hTERT的聚合酶链式(PCR)反应 | 第51页 |
| ·PCR产物的双酶切反应 | 第51页 |
| ·pGL3-Basic和hTERT 261片段的连接反应 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-53页 |
| ·hTERT 261 PCR反应 | 第52页 |
| ·荧光素酶报告基因表达载体构建 | 第52-53页 |
| ·实验小结 | 第53-54页 |
| 第六章 Tat蛋白细胞凋亡及周期调控作用通路及靶点研究 | 第54-60页 |
| ·概述 | 第54页 |
| ·实验材料与方法 | 第54-56页 |
| ·实验材料与设备 | 第54页 |
| ·Tat转染K562细胞,Hela细胞,HCT116细胞对周期调控因子启动子的调控 | 第54-56页 |
| ·PI单染检测Tat对细胞的周期阻滞 | 第56页 |
| ·western blot检测周期相关蛋白表达 | 第56页 |
| ·统计学方法 | 第56页 |
| ·实验结果 | 第56-59页 |
| ·0.5uMTat对HeLa,HCT116,A375,K562细胞HIV-1LTR以及P21启动子活性调控 | 第56-57页 |
| ·tat对Hela细胞周期阻滞影响 | 第57-58页 |
| ·Tat在Hela细胞中对细胞中对cyclinDl,cyclinE启动子调控 | 第58-59页 |
| ·Tat在Hela细胞中对细胞中对p21,CyclinD,CyclineE蛋白水平调控 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 第七章 Vpr蛋白细胞凋亡及周期调控作用通路及靶点研究 | 第60-70页 |
| ·概述 | 第60页 |
| ·实验材料与方法 | 第60-63页 |
| ·实验材料与设备 | 第60页 |
| ·Vpr调控K562细胞,Hela细胞,HCT116细胞对周期调控因子启动子 | 第60-61页 |
| ·PI单染检测Vpr对细胞的周期阻滞和凋亡 | 第61页 |
| ·提取细胞RNA及Realtime检测P21,及cyclinD1,cyclinE,cyclinB1,bax,bcl-2mRNA表达 | 第61页 |
| ·western blot检测周期相关及凋亡相关蛋白表达 | 第61页 |
| ·caspase3活性检测 | 第61-63页 |
| ·HSP70启动子活性检测 | 第63页 |
| ·统计学方法 | 第63页 |
| ·实验结果 | 第63-68页 |
| ·vpr在HCT116,Hela细胞中调节LTR,P21,cyclinD1,cyclinE,cyclinB1启动子活性 | 第63-64页 |
| ·流式Annexin V-FITC/PI双染检测vpr在HCT-116,Hela细胞中致凋亡作用研究 | 第64-65页 |
| ·流式PI单染检测vpr在HCT-116,Hela细胞中周期阻滞作用研究 | 第65页 |
| ·vpr在Hela细胞中调节P21,cyclinD1,cyclinE,cyclinB1,bcl-2,bax mRNA水平 | 第65-66页 |
| ·vpr在Hela细胞中调节P21,cyclinD1,cyclinE,cyclinB1,bcl-2,bax的蛋白表达水平 | 第66-67页 |
| ·Tat,vpr在Hela中上调caspase3活性 | 第67-68页 |
| ·Tat,vpr在Hela中对氧化损伤相关指标Hsp70家族启动子活性调节 | 第68页 |
| ·结论 | 第68-70页 |
| 第八章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 论文及专利发表情况 | 第81页 |
