| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 縮略词 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 脂肪细胞研究概况 | 第11-12页 |
| ·脂肪细胞的分化,增殖 | 第11页 |
| ·成熟脂肪细胞的去分化与再分化 | 第11-12页 |
| 2 肌内脂肪研究概况 | 第12页 |
| ·肌内脂肪特点 | 第12页 |
| ·肌内脂肪含量的选育 | 第12页 |
| 3 脂肪的分子调控机制 | 第12-18页 |
| ·脂肪细胞分子生物调控 | 第12-13页 |
| ·WNT信号通路 | 第13-14页 |
| ·TGFβ超家族信号通路 | 第14-15页 |
| ·转录因子对脂肪细胞终末分化的调控 | 第15-17页 |
| ·肌内脂肪沉积的分子调控机制 | 第17-18页 |
| 4 SFRS18研究概况 | 第18-19页 |
| 5 PPARγ研究概况 | 第19-23页 |
| ·PPARγ结构特点 | 第19页 |
| ·PPARγ促脂肪细胞的终末分化 | 第19-20页 |
| ·PPARγ与其他转录因子的作用 | 第20-21页 |
| ·PPARγ的表观遗传调控 | 第21-23页 |
| 第二章 猪前体脂肪细胞系的建立与诱导方法的优化 | 第23-35页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验动物 | 第23页 |
| ·主要实验试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器及实验器械 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-28页 |
| ·细胞分离及培养 | 第24-25页 |
| ·显微镜下观察脂肪细胞自动去分化及传代培养 | 第25页 |
| ·细胞染色体核型分析 | 第25页 |
| ·前体脂肪细胞诱导条件优化 | 第25-26页 |
| ·油红O染色测定脂滴含量 | 第26页 |
| ·RNA提取 | 第26-27页 |
| ·基因定量分析 | 第27页 |
| ·数据统计 | 第27-28页 |
| 3 实验结果 | 第28-33页 |
| ·成熟脂肪细胞的分离及去分化形态学观察 | 第28页 |
| ·去分化前体脂肪细胞的核型分析 | 第28-29页 |
| ·去分化前体脂肪细胞诱导再分化条件优化 | 第29-31页 |
| ·去分化前体脂肪细胞诱导再分化为成熟脂肪细胞 | 第31页 |
| ·脂肪细胞分化标志基因定量分析 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 shRNA沉默猪SFRS18基因对前体脂肪细胞分化影响的研究 | 第35-45页 |
| 1 实验材料 | 第35-36页 |
| ·试验材料 | 第35页 |
| ·网络资源及软件 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·仪器设备 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-38页 |
| ·靶向猪SFRS18基因shRNA序列设计与构建 | 第36-37页 |
| ·猪脂肪细胞分离、培养及新霉素最佳浓度的筛选 | 第37页 |
| ·细胞转染 | 第37-38页 |
| ·shRNA转染后诱导细胞分化 | 第38页 |
| ·油红O染色和提取 | 第38页 |
| ·细胞总RNA提取及相对定量Real-time RT-PCR | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-43页 |
| ·新霉素最佳浓度的筛选 | 第38-39页 |
| ·转染猪前体脂肪细胞及shRNA干扰效率检测 | 第39-40页 |
| ·SFRS18干扰载体稳定转染至细胞 | 第40页 |
| ·SFRS18在脂肪细胞分化过程中的表达 | 第40-41页 |
| ·敲除SFRS18对猪脂肪细胞分化的影响 | 第41-42页 |
| ·敲除SFRS18后对FABP4和PPARγ基因表达的影响 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 PPARγ基因调控区域多态性分析及其与猪肌内脂肪关系 | 第45-67页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-46页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-54页 |
| ·SNP位点的筛选 | 第46-50页 |
| ·PPARγ基因启动子表达载体构建 | 第50-53页 |
| ·细胞实验 | 第53-54页 |
| 3 实验结果 | 第54-64页 |
| ·PPARγ基因调控区SNP位点的筛选 | 第54-55页 |
| ·PCR-SSCP方法突变位点基因分型 | 第55-58页 |
| ·突变位点与肌内脂肪含量的相关性 | 第58-60页 |
| ·PPARγ基因不同基因型启动子表达载体构建 | 第60-62页 |
| ·PPARγ基因启动区域不同基因型活性分析 | 第62-63页 |
| ·转录结合位点的预测 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 全文结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
