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代谢工程改造大肠杆菌发酵生产氨基葡萄糖及过程优化与控制

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
符号、变量、缩略词等本论文专用术语的注释表第10-11页
第一章 绪论第11-19页
   ·概述第11-12页
     ·氨基葡萄糖的性质第11页
     ·氨基葡萄糖的用途第11-12页
     ·氨基葡萄糖的生产方法第12页
   ·氨基葡萄糖的生物合成与分泌第12-14页
   ·发酵法生产氨基葡萄糖的国内外研究现状第14-16页
     ·利用真菌发酵生产氨基葡萄糖第14页
     ·利用基因工程菌发酵生产氨基葡萄糖第14-15页
     ·微生物方法生产氨基葡萄糖可能的发展趋势第15-16页
     ·氨基葡萄糖发酵工艺第16页
     ·氨基葡萄糖的提取与精制第16页
   ·发酵法生产氨基葡萄糖的主要技术难题第16页
   ·本文主要研究内容第16-19页
     ·立题依据和研究意义第16-17页
     ·本论文主要研究内容第17-19页
第二章 氨基葡萄糖合成酶和乙酰化酶基因在大肠杆菌中的克隆表达第19-29页
   ·前言第19页
   ·材料与方法第19-23页
     ·试验材料第19-20页
     ·试验方法第20-23页
   ·结果与讨论第23-28页
     ·重组质粒的构建第23页
     ·重组质粒的酶切分析第23-24页
     ·重组质粒的序列分析第24-25页
     ·重组质粒表达外源蛋白分析第25页
     ·乳糖诱导重组质粒表达外源蛋白分析第25页
     ·重组质粒稳定性的检测结果第25-26页
     ·酶活检测结果第26页
     ·重组菌GlcN的发酵第26-28页
   ·本章小结第28-29页
第三章 氨基葡萄糖发酵过程优化第29-41页
   ·前言第29-30页
   ·材料与方法第30-32页
     ·试验材料第30页
     ·试验方法第30-32页
   ·结果与分析第32-39页
     ·葡萄糖不同流加方式下发酵的实验结果第32页
     ·基于葡萄糖分阶段流加策略的发酵结果第32-35页
     ·不控制溶氧水平条件下氨基葡萄糖发酵的实验结果第35页
     ·控制单一溶氧水平条件下氨基葡萄糖发酵的实验结果第35-36页
     ·基于分阶段溶氧水平控制策略的发酵结果第36-39页
     ·葡萄糖流加策略与分阶段DO控制策略结合的氨基葡萄糖发酵第39页
   ·讨论第39页
   ·本章小结第39-41页
第四章 大肠杆菌nagE和manX基因的敲除对氨基葡萄糖发酵的影响第41-51页
   ·前言第41页
   ·材料与方法第41-44页
     ·试验材料第41-43页
     ·试验方法第43-44页
   ·结果与分析第44-48页
     ·卡那抗性基因替代nagE及manX基因第44-45页
     ·卡那抗性基因的去除第45-46页
     ·发酵实验结果第46-48页
   ·讨论第48-50页
   ·本章小结第50-51页
第五章 大肠杆菌ptsG基因的敲除对氨基葡萄糖发酵的影响第51-61页
   ·前言第51页
   ·材料与方法第51-54页
     ·试验材料第51-52页
     ·试验方法第52-54页
   ·结果与分析第54-58页
     ·卡那抗性基因替代ptsG基因第54-55页
     ·卡那抗性基因的去除第55页
     ·大肠杆菌glmS、gna1、galP和glk基因的克隆表达第55-57页
     ·ptsG基因敲除对重组菌氨基葡萄糖发酵影响的结果第57-58页
   ·讨论第58-59页
   ·本章小结第59-61页
第六章 基于对基因转录水平研究的代谢工程策略改造大肠杆菌生产氨基葡萄糖第61-72页
   ·前言第61-62页
   ·材料与方法第62-66页
     ·试验材料第62-64页
     ·试验方法第64-65页
     ·转录水平分析第65页
     ·重组大肠杆菌的发酵第65-66页
     ·分析方法第66页
   ·结果与分析第66-70页
     ·细菌总RNA提取第66页
     ·Real-time PCR结果第66-67页
     ·卡那抗性基因替代pykA基因第67页
     ·卡那抗性基因替代pykF基因第67-68页
     ·敲除pykA基因的卡那抗性基因的去除第68-69页
     ·敲除pykF基因的卡那抗性基因的去除第69页
     ·重组菌发酵的实验结果第69-70页
   ·讨论第70页
   ·本章小结第70-72页
主要结论与展望第72-74页
论文主要创新点第74-75页
致谢第75-76页
参考文献第76-81页
附录 作者在攻读博士学位期间发表的论文第81页

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