| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| ·工业微生物菌株育种的重要意义 | 第11页 |
| ·早期工业菌种选育理论和方法学的研究历史与进展简介 | 第11-17页 |
| ·诱变育种 | 第11-12页 |
| ·基因重组育种 | 第12页 |
| ·基因工程和早期代谢工程育种策略 | 第12-17页 |
| ·后基因组时代下的工业微生物菌种育种新理论新策略简介 | 第17-23页 |
| ·高通量组学分析技术在育种中的应用 | 第17-18页 |
| ·基因组水平代谢网络模型指导育种 | 第18页 |
| ·系统代谢工程育种策略 | 第18页 |
| ·合成生物学育种策略 | 第18-19页 |
| ·协调产物合成与菌株活性的新育种方法 | 第19-23页 |
| ·立题依据与主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 大肠杆菌多位点高效基因删除方法的建立 | 第25-35页 |
| ·前言 | 第25-26页 |
| ·材料与方法 | 第26-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| ·试剂与仪器 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·Red 重组系统的诱导 | 第27-28页 |
| ·电转化感受态细胞的制备、电击转化及转化子的筛选 | 第28页 |
| ·抗性筛选标记的拯救 | 第28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-33页 |
| ·基于 Red 和 Xer 重组系统的基因删除 | 第28-30页 |
| ·菌株 E. coli B0013 中 ackA-pta 基因的删除 | 第30-31页 |
| ·菌株 E. coli B0013-010 中 pps 基因的删除 | 第31-33页 |
| ·本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 竞争代谢途径中多基因的删除提高 D-乳酸合成质和量 | 第35-59页 |
| ·前言 | 第35-37页 |
| ·材料与方法 | 第37-42页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·试剂与仪器 | 第37-38页 |
| ·多基因删除菌株的构建 | 第38-40页 |
| ·发酵试验 | 第40-41页 |
| ·生物量测定 | 第41页 |
| ·葡萄糖浓度测定 | 第41页 |
| ·发酵液样品分析 | 第41-42页 |
| ·乳酸光学构型分析 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-57页 |
| ·大肠杆菌中心代谢途径的多个基因的组合删除 | 第42-46页 |
| ·代谢途径的单基因删除可显著影响乳酸合成 | 第46-47页 |
| ·代谢途径编码基因删除的组合可提高乳酸合成速率和质量 | 第47-50页 |
| ·低供氧发酵可提高 D-乳酸合成速率 | 第50-57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 ldhA 基因转录水平的微调节 | 第59-75页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·材料与方法 | 第60-62页 |
| ·菌株和质粒 | 第60-61页 |
| ·引物 | 第61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61页 |
| ·分子操作 | 第61-62页 |
| ·DNA 序列测定与分析 | 第62页 |
| ·培养基与培养方法 | 第62页 |
| ·启动子预测方法 | 第62页 |
| ·其它分析方法 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-74页 |
| ·菌株 B0013 ldhA 基因上游序列的测定及分析 | 第62-65页 |
| ·ldhA 基因上游区域部分缺少重组菌株的构建 | 第65-67页 |
| ·ldhA 基因上游区域部分缺失可降低好氧阶段乳酸的合成 | 第67-69页 |
| ·ldhA 基因-96 位点下游仍具有转录启动区域 | 第69-70页 |
| ·ldhA 基因-61 位点下游不具有转录启动区域 | 第70-74页 |
| ·本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 温控开关的组装实现 D-乳酸高效生物合成 | 第75-93页 |
| ·前言 | 第75-76页 |
| ·材料与方法 | 第76-78页 |
| ·菌株和质粒 | 第76页 |
| ·引物 | 第76-77页 |
| ·试剂与仪器 | 第77页 |
| ·分子操作 | 第77页 |
| ·培养基与培养方法 | 第77-78页 |
| ·乳酸脱氢酶酶活测定 | 第78页 |
| ·其它分析方法 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-89页 |
| ·乳酸脱氢酶基因转录控制方式的选择 | 第78-82页 |
| ·温控开关控制乳酸合成菌株 B0013-070B 的构建 | 第82-85页 |
| ·B0013-070B 重组菌的 D-乳酸发酵性能 | 第85-89页 |
| ·本章小结 | 第89-93页 |
| 结论 | 第93-95页 |
| 论文创新点 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第109页 |
