| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第7页 |
| ·毕赤酵母和哺乳动物细胞N-糖基化修饰 | 第7-9页 |
| ·毕赤酵母N-糖基改造方法和国内外研究进展 | 第9-10页 |
| ·毕赤酵母糖基化改造初级阶段敲除och1 基因方法 | 第10-11页 |
| ·毕赤酵母och1 缺陷菌株生理性状、存在的问题及可能的解决措施 | 第11页 |
| ·本论文的研究意义及内容 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·培养基与培养条件 | 第13-14页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·培养条件 | 第14页 |
| ·主要试剂、试剂盒、工具酶与分子量标准 | 第14-15页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·试剂盒 | 第14页 |
| ·工具酶 | 第14页 |
| ·分子量标准 | 第14-15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·主要溶液配制 | 第15-17页 |
| ·抗生素的配制 | 第15页 |
| ·100 mmol/L IPTG 溶液的配制 | 第15页 |
| ·20 mg/mL X-gal 溶液配制 | 第15页 |
| ·二硫苏糖醇（DTT）配制 | 第15页 |
| ·SDS-PAGE 电泳溶液配制 | 第15-16页 |
| ·SDS-PAGE 电泳凝胶配制 | 第16页 |
| ·琼脂糖电泳相关溶液 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第17页 |
| ·大肠杆菌感受态的转化 | 第17页 |
| ·大肠杆菌重组质粒的抽提 | 第17页 |
| ·酵母基因组制备 | 第17-18页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·酵母感受态细胞的转化 | 第19页 |
| ·GS115 ura3 基因的敲除 | 第19-21页 |
| ·JC308 och1 基因的敲除 | 第21-23页 |
| ·och1 缺陷株表型及分泌蛋白的研究 | 第23-26页 |
| ·EPO 在毕赤酵母X-33 菌株中的表达 | 第26-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-47页 |
| ·GS115 ura3 基因的敲除 | 第29-36页 |
| ·敲除GS115 ura3 的载体的构建及鉴定 | 第30-31页 |
| ·GS115 对5-FOA 敏感菌株的筛选 | 第31-32页 |
| ·GS115 ura3 基因敲除与与表型及其基因鉴定 | 第32-36页 |
| ·JC308 och1 基因的敲除 | 第36-40页 |
| ·JC308 och1 基因敲除载体构建与鉴别 | 第36-37页 |
| ·JC308 och1 基因敲除和基因及表型鉴定 | 第37-39页 |
| ·GM-CSF 在JC308 原始及缺陷株中表达差异 | 第39-40页 |
| ·糖基化突变株表型 | 第40-42页 |
| ·糖基化缺陷影响毕赤酵母的生长 | 第40页 |
| ·糖基化缺陷导致菌株对温度敏感 | 第40-41页 |
| ·糖基化突变株对刚果红敏感 | 第41页 |
| ·糖基化突变株导致细胞壁缺陷 | 第41-42页 |
| ·糖基化突变对细胞存活率的影响 | 第42页 |
| ·EPO 在X-33 野生株中的表达 | 第42-47页 |
| ·pPICZaA/EPO 表达载体的构建 | 第42页 |
| ·酵母工程菌株的构建 | 第42-44页 |
| ·EPO 的表达分析 | 第44-47页 |
| 第四章 结论 | 第47-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
