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酒明串珠菌不对称合成手性醇及其反Prelog脱氢酶的酶学特性研究

摘要第1-6页
Abstract第6-12页
第一章 绪论第12-26页
   ·手性化合物的应用与研究进展第12-16页
     ·手性化合物的应用概况第12-13页
     ·手性化合物的制备研究概况第13-14页
     ·生物法制备手性化合物的研究概述第14-16页
   ·手性2-辛醇的研究进展第16-21页
     ·脂肪酶动力学拆分法的研究概况第17-18页
     ·醇脱氢酶的不对称还原法的研究概况第18-21页
   ·醇脱氢酶(ADH)简介第21-22页
     ·NAD(P) 依赖型ADH 概述第21-22页
     ·反Prelog 规则ADH 概述第22页
   ·本课题研究内容第22-26页
     ·立题的目的和意义第22-23页
     ·论文的主要研究内容第23-26页
第二章 Oenococcus oeni CECT4730 产(R)-ADH 发酵培养基的优化第26-38页
   ·前言第26页
   ·材料与方法第26-31页
     ·菌种第26-27页
     ·培养基第27页
     ·主要试剂第27页
     ·主要仪器第27-28页
     ·O. oeni CECT 4730 的摇瓶发酵第28页
     ·全细胞不对称还原反应第28页
     ·全细胞脱氢酶活力的测定第28-29页
     ·产物检测与分析第29-30页
     ·葡萄糖浓度的测定第30页
     ·Plackett-Burman 设计法第30页
     ·最陡爬坡实验第30-31页
     ·响应面分析法第31页
   ·结果与讨论第31-37页
     ·不同发酵培养基对O.oeni CECT4730 的生长和转化的影响第31页
     ·Plackett - Burman 设计筛选显著性影响因素第31-33页
     ·番茄汁对细胞量和脱氢酶活力的影响第33页
     ·最陡爬坡实验确定最大响应区域第33-34页
     ·响应面设计确定显著因素的最优水平第34-37页
   ·小结第37-38页
第三章 Oenococcus oeni CECT4730 产(R)-ADH 的发酵放大研究第38-46页
   ·前言第38页
   ·材料与方法第38-39页
     ·菌种第38-39页
     ·培养基第39页
     ·主要试剂第39页
     ·主要仪器第39页
     ·O. oeni CECT 4730 的摇瓶发酵第39页
     ·发酵放大工艺流程第39页
     ·种子液培养第39页
     ·发酵罐发酵第39页
     ·全细胞脱氢酶活力的测定第39页
     ·葡萄糖浓度的测定第39页
   ·结果与讨论第39-45页
     ·摇瓶条件下的非营养条件优化第39-43页
     ·O. oeni CECT 4730 的发酵罐发酵第43-45页
   ·小结第45-46页
第四章Oenococcus oeni CECT4730 不对称合成(R)-2-辛醇的反应系统的研究第46-58页
   ·前言第46页
   ·材料与方法第46-47页
     ·菌种第46页
     ·培养基第46页
     ·主要试剂第46页
     ·主要仪器第46页
     ·菌体细胞培养第46-47页
     ·水相系统中的催化反应第47页
     ·两相系统中的催化反应第47页
     ·产物的检测第47页
   ·结果与讨论第47-56页
     ·两相反应系统的构建第47-48页
     ·水相和两相系统中全细胞催化反应的时间进程第48-49页
     ·两相系统的Va/Vo 对反应的影响第49-50页
     ·pH 对反应的影响第50-51页
     ·温度对反应的影响第51页
     ·摇床转速对反应的影响第51-52页
     ·辅助底物的影响第52-54页
     ·催化剂和底物的最适用量比例第54-55页
     ·底物浓度对反应的影响第55-56页
   ·小结第56-58页
第五章 Oenococcus oeni CECT4730 中(R)-ADH 的分离纯化及纯酶的催化特性第58-68页
   ·前言第58页
   ·材料与方法第58-61页
     ·菌种第58页
     ·培养基第58页
     ·主要试剂第58-59页
     ·主要仪器第59页
     ·(R)-ADH 的发酵生产第59页
     ·蛋白质含量的测定第59页
     ·酶活力测定第59页
     ·(R)-ADH 的分离纯化第59-61页
     ·酶纯度的检测第61页
     ·纯酶催化不对称还原 2-辛酮反应第61页
   ·结果与讨论第61-66页
     ·细胞破碎方法的确定第61-62页
     ·沉淀法的确定第62-63页
     ·Q-Sepharose-FF 阴离子柱层析第63-64页
     ·Sephacryl S-200 凝胶柱层析第64-65页
     ·酶纯度检测第65页
     ·纯酶催化反应产物的构型分析第65-66页
   ·小结第66-68页
第六章 Oenococcus oeni CECT4730 中(R)-ADH 的酶学特性研究第68-77页
   ·前言第68页
   ·材料与方法第68-70页
     ·酶第68页
     ·主要试剂第68页
     ·主要仪器第68页
     ·酶活测定方法第68页
     ·蛋白含量测定第68-69页
     ·主要酶学性质试验第69-70页
   ·结果与讨论第70-76页
     ·酶蛋白分子量的确定第70页
     ·酶的最适反应pH 和pH 稳定性第70-71页
     ·酶的最适反应温度和热稳定性第71-73页
     ·金属离子及其他化合物对酶活的影响第73页
     ·酶的底物选择性第73-74页
     ·辅酶依耐性第74页
     ·酶的动力学性质第74-76页
   ·小结第76-77页
主要结论第77-78页
展望第78-79页
论文创新点第79-80页
参考文献第80-87页
致谢第87-88页
附录:博士研究期间发表的论文第88页

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