摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-12页 |
第一章 绪论 | 第12-26页 |
·手性化合物的应用与研究进展 | 第12-16页 |
·手性化合物的应用概况 | 第12-13页 |
·手性化合物的制备研究概况 | 第13-14页 |
·生物法制备手性化合物的研究概述 | 第14-16页 |
·手性2-辛醇的研究进展 | 第16-21页 |
·脂肪酶动力学拆分法的研究概况 | 第17-18页 |
·醇脱氢酶的不对称还原法的研究概况 | 第18-21页 |
·醇脱氢酶(ADH)简介 | 第21-22页 |
·NAD(P) 依赖型ADH 概述 | 第21-22页 |
·反Prelog 规则ADH 概述 | 第22页 |
·本课题研究内容 | 第22-26页 |
·立题的目的和意义 | 第22-23页 |
·论文的主要研究内容 | 第23-26页 |
第二章 Oenococcus oeni CECT4730 产(R)-ADH 发酵培养基的优化 | 第26-38页 |
·前言 | 第26页 |
·材料与方法 | 第26-31页 |
·菌种 | 第26-27页 |
·培养基 | 第27页 |
·主要试剂 | 第27页 |
·主要仪器 | 第27-28页 |
·O. oeni CECT 4730 的摇瓶发酵 | 第28页 |
·全细胞不对称还原反应 | 第28页 |
·全细胞脱氢酶活力的测定 | 第28-29页 |
·产物检测与分析 | 第29-30页 |
·葡萄糖浓度的测定 | 第30页 |
·Plackett-Burman 设计法 | 第30页 |
·最陡爬坡实验 | 第30-31页 |
·响应面分析法 | 第31页 |
·结果与讨论 | 第31-37页 |
·不同发酵培养基对O.oeni CECT4730 的生长和转化的影响 | 第31页 |
·Plackett - Burman 设计筛选显著性影响因素 | 第31-33页 |
·番茄汁对细胞量和脱氢酶活力的影响 | 第33页 |
·最陡爬坡实验确定最大响应区域 | 第33-34页 |
·响应面设计确定显著因素的最优水平 | 第34-37页 |
·小结 | 第37-38页 |
第三章 Oenococcus oeni CECT4730 产(R)-ADH 的发酵放大研究 | 第38-46页 |
·前言 | 第38页 |
·材料与方法 | 第38-39页 |
·菌种 | 第38-39页 |
·培养基 | 第39页 |
·主要试剂 | 第39页 |
·主要仪器 | 第39页 |
·O. oeni CECT 4730 的摇瓶发酵 | 第39页 |
·发酵放大工艺流程 | 第39页 |
·种子液培养 | 第39页 |
·发酵罐发酵 | 第39页 |
·全细胞脱氢酶活力的测定 | 第39页 |
·葡萄糖浓度的测定 | 第39页 |
·结果与讨论 | 第39-45页 |
·摇瓶条件下的非营养条件优化 | 第39-43页 |
·O. oeni CECT 4730 的发酵罐发酵 | 第43-45页 |
·小结 | 第45-46页 |
第四章Oenococcus oeni CECT4730 不对称合成(R)-2-辛醇的反应系统的研究 | 第46-58页 |
·前言 | 第46页 |
·材料与方法 | 第46-47页 |
·菌种 | 第46页 |
·培养基 | 第46页 |
·主要试剂 | 第46页 |
·主要仪器 | 第46页 |
·菌体细胞培养 | 第46-47页 |
·水相系统中的催化反应 | 第47页 |
·两相系统中的催化反应 | 第47页 |
·产物的检测 | 第47页 |
·结果与讨论 | 第47-56页 |
·两相反应系统的构建 | 第47-48页 |
·水相和两相系统中全细胞催化反应的时间进程 | 第48-49页 |
·两相系统的Va/Vo 对反应的影响 | 第49-50页 |
·pH 对反应的影响 | 第50-51页 |
·温度对反应的影响 | 第51页 |
·摇床转速对反应的影响 | 第51-52页 |
·辅助底物的影响 | 第52-54页 |
·催化剂和底物的最适用量比例 | 第54-55页 |
·底物浓度对反应的影响 | 第55-56页 |
·小结 | 第56-58页 |
第五章 Oenococcus oeni CECT4730 中(R)-ADH 的分离纯化及纯酶的催化特性 | 第58-68页 |
·前言 | 第58页 |
·材料与方法 | 第58-61页 |
·菌种 | 第58页 |
·培养基 | 第58页 |
·主要试剂 | 第58-59页 |
·主要仪器 | 第59页 |
·(R)-ADH 的发酵生产 | 第59页 |
·蛋白质含量的测定 | 第59页 |
·酶活力测定 | 第59页 |
·(R)-ADH 的分离纯化 | 第59-61页 |
·酶纯度的检测 | 第61页 |
·纯酶催化不对称还原 2-辛酮反应 | 第61页 |
·结果与讨论 | 第61-66页 |
·细胞破碎方法的确定 | 第61-62页 |
·沉淀法的确定 | 第62-63页 |
·Q-Sepharose-FF 阴离子柱层析 | 第63-64页 |
·Sephacryl S-200 凝胶柱层析 | 第64-65页 |
·酶纯度检测 | 第65页 |
·纯酶催化反应产物的构型分析 | 第65-66页 |
·小结 | 第66-68页 |
第六章 Oenococcus oeni CECT4730 中(R)-ADH 的酶学特性研究 | 第68-77页 |
·前言 | 第68页 |
·材料与方法 | 第68-70页 |
·酶 | 第68页 |
·主要试剂 | 第68页 |
·主要仪器 | 第68页 |
·酶活测定方法 | 第68页 |
·蛋白含量测定 | 第68-69页 |
·主要酶学性质试验 | 第69-70页 |
·结果与讨论 | 第70-76页 |
·酶蛋白分子量的确定 | 第70页 |
·酶的最适反应pH 和pH 稳定性 | 第70-71页 |
·酶的最适反应温度和热稳定性 | 第71-73页 |
·金属离子及其他化合物对酶活的影响 | 第73页 |
·酶的底物选择性 | 第73-74页 |
·辅酶依耐性 | 第74页 |
·酶的动力学性质 | 第74-76页 |
·小结 | 第76-77页 |
主要结论 | 第77-78页 |
展望 | 第78-79页 |
论文创新点 | 第79-80页 |
参考文献 | 第80-87页 |
致谢 | 第87-88页 |
附录:博士研究期间发表的论文 | 第88页 |