产CLA植物乳杆菌诱变后LAI基因mRNA差异性分析
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| ·共轭亚油酸简介 | 第11-12页 |
| ·共轭亚油酸的结构及其性质 | 第11页 |
| ·共轭亚油酸的来源 | 第11页 |
| ·共轭亚油酸的生理功能 | 第11页 |
| ·共轭亚油酸的合成 | 第11-12页 |
| ·化学合成 | 第11页 |
| ·生物合成 | 第11-12页 |
| ·亚油酸异构酶的简介 | 第12页 |
| ·共轭亚油酸的检测方法 | 第12页 |
| ·诱变技术的简介 | 第12-14页 |
| ·物理诱变 | 第12-13页 |
| ·紫外照射 | 第12-13页 |
| ·X 射线和γ-射线 | 第13页 |
| ·微波辐射 | 第13页 |
| ·化学诱变 | 第13-14页 |
| ·烷化剂 | 第13页 |
| ·碱基类似物 | 第13页 |
| ·无机化合物 | 第13-14页 |
| ·离子注入 | 第14页 |
| ·核酸的定量分析法 | 第14-15页 |
| ·化学发光法 | 第14页 |
| ·光度分析法 | 第14页 |
| ·荧光分析法 | 第14-15页 |
| ·实时荧光定量PCR技术简介 | 第15页 |
| ·选题依据 | 第15-16页 |
| ·研究内容 | 第16页 |
| ·研究的技术路线 | 第16-17页 |
| 2. 试验材料与方法 | 第17-28页 |
| ·仪器与试剂 | 第17-18页 |
| ·试验方法 | 第18-28页 |
| ·植物乳杆菌生长曲线的绘制 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·菌体的活化 | 第18-19页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第19页 |
| ·CLA 标准曲线绘制 | 第19页 |
| ·植物乳杆菌的离子束诱变 | 第19-20页 |
| ·菌体的活化 | 第19页 |
| ·菌体的培养 | 第19页 |
| ·菌株的诱变处理 | 第19页 |
| ·菌体计数和发酵方法 | 第19-20页 |
| ·共轭亚油酸含量测定 | 第20页 |
| ·存活率、突变率的计算方法 | 第20页 |
| ·负突变菌株的稳定遗传 | 第20-21页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第21-24页 |
| ·植物乳杆菌 DNA 的提取 | 第21页 |
| ·引物的设计 | 第21页 |
| ·目的片段的扩增、检测及纯化 | 第21-22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·目的片段的连接 | 第22-23页 |
| ·目的片段的转化 | 第23页 |
| ·阳性克隆子的鉴定 | 第23页 |
| ·克隆质粒的提取 | 第23-24页 |
| ·质粒浓度的检测 | 第24页 |
| ·质粒拷贝数的计算方法 | 第24页 |
| ·质粒拷贝数的倍比稀释 | 第24页 |
| ·质粒标准品标准曲线的绘制 | 第24-25页 |
| ·植物乳杆菌总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·RNA 提取前的准备 | 第25页 |
| ·实验试剂的配制 | 第25页 |
| ·实验耗材、玻璃器皿上的 RNase 清除 | 第25页 |
| ·植物乳杆菌总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·RNA 得率检测 | 第26页 |
| ·RNA 纯度检测 | 第26页 |
| ·RNA 的完整性鉴定 | 第26页 |
| ·反转录酶 M-MLv 合成cDNA | 第26-27页 |
| ·电泳检测 | 第27页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-42页 |
| ·植物乳杆菌 N+离子束诱变 | 第28-35页 |
| ·菌株生长曲线的绘制 | 第28页 |
| ·CLA 标准曲线 | 第28-29页 |
| ·离子注入的诱变效应 | 第29-31页 |
| ·不同剂量离子束处理后菌落的生长图像比较 | 第29-30页 |
| ·离子注入的致死效应 | 第30-31页 |
| ·菌体存活率曲线 | 第31页 |
| ·菌株 CLA 含量的测定结果 | 第31-33页 |
| ·不同离子剂量对菌株突变率的影响 | 第33-34页 |
| ·不同离子剂量对菌株突变幅度的影响 | 第34-35页 |
| ·负突变菌株稳定遗传结果 | 第35页 |
| ·质粒标准品的制备 | 第35-39页 |
| ·菌株 DNA 的提取结果 | 第35-36页 |
| ·菌株 LAI 基因 PCR 结果 | 第36-37页 |
| ·菌落 PCR 结果 | 第37页 |
| ·克隆质粒 DNA 提取结果 | 第37-38页 |
| ·质粒浓度的检测及拷贝数的计算结果 | 第38页 |
| ·质粒标准品标准曲线 | 第38-39页 |
| ·菌株总 RNA 的提取结果 | 第39页 |
| ·反转录结果 | 第39-40页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第40-41页 |
| ·标准品和未知样品的扩增曲线 | 第40页 |
| ·标准品和未知样品的熔解曲线 | 第40-41页 |
| ·野生型及未知样品起始拷贝数 | 第41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 主要创新点 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 附录 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48页 |
