| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·TGE 的流行病学 | 第10页 |
| ·TGE 的症状及病理变化 | 第10-11页 |
| ·TGEV 的病原特征 | 第11-12页 |
| ·TGEV 基因组学 | 第12-16页 |
| ·TGEV 基因组结构 | 第12-13页 |
| ·TGEV 的结构蛋白 | 第13-15页 |
| ·TGEV 的非结构蛋白 | 第15-16页 |
| ·猪传染性胃肠炎诊断技术的研究进展 | 第16-17页 |
| ·分子生物学诊断技术 | 第16-17页 |
| ·血清学检测技术 | 第17页 |
| ·TGEV 的防制 | 第17页 |
| ·TGEV 反向遗传的研究进展 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 猪传染性胃肠炎病毒的分离与培养 | 第19-25页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·猪粪便来源 | 第19页 |
| ·用于病毒培养的细胞系 | 第19页 |
| ·细胞培养基 | 第19页 |
| ·RT-PCR 检测试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器设备 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-23页 |
| ·患有TGEV 病猪粪便的处理 | 第20页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒的细胞培养 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR 法检测细胞中的 TGEV | 第21-23页 |
| ·结果 | 第23-24页 |
| ·细胞攻毒 | 第23页 |
| ·RT-PCR 实验结果 | 第23-24页 |
| ·测序结果 | 第24页 |
| ·讨论 | 第24-25页 |
| 3 猪传染性胃肠炎病毒全基因组序列测定与分析 | 第25-34页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·毒株及主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26-28页 |
| ·病毒总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR 扩增 | 第28-30页 |
| ·PCR 产物回收与连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒 DNA 制备及重组质粒的 PCR 鉴定 | 第31-32页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒全基因组的连接 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-34页 |
| ·病毒基因组cDNA 片段的 RT-PCR 扩增结果 | 第32页 |
| ·RT-PCR 产物的克隆、测序与序列拼接 | 第32-33页 |
| ·TGEV 全基因组序列比较和系统进化树构建 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34页 |
| 4 猪传染性胃肠炎病毒 S 基因 D 位点缺失原核表达及纯化 | 第34-43页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·菌株及载体 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·方法 | 第36-40页 |
| ·引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·RT-PCR | 第36-37页 |
| ·PCR 产物纯化与载体连接 | 第37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·重组质粒 DNA 制备及重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·原核表达载体 PET-32a 的构建 | 第37-39页 |
| ·重组表达载体的诱导表达 | 第39页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·S 基因的PCR 结果 | 第40页 |
| ·目的片段的克隆鉴定 | 第40页 |
| ·重组表达载体的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·原核蛋白表达及最优诱导浓度的确定 | 第40-41页 |
| ·蛋白可溶性确定 | 第41页 |
| ·蛋白的纯化与复性 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录 | 第50-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
