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副溶血弧菌和创伤弧菌双重Real-time PCR检测方法的建立及其应用

原创性声明第1页
学位论文版权使用授权书第3-8页
中文摘要第8-10页
英文摘要第10-13页
前言第13-15页
第一篇 文献综述第15-31页
 第一章 副溶血弧菌的分子生物学研究进展第15-20页
  1 基因组DNA第15页
  2 质粒第15-16页
  3 鞭毛基因系统第16页
  4 致病因子第16-19页
   ·溶血毒素第16-18页
     ·耐热性溶血毒素(TDH)第16-17页
     ·TDH相关溶血毒素(TRH)第17-18页
     ·不耐热溶血毒素(TLH)第18页
   ·尿素酶第18页
   ·黏附因子第18-19页
   ·侵袭力第19页
  5 结语第19-20页
 第二章 副溶血弧菌的基因分型及分子诊断研究进展第20-26页
  1 基因分型的研究进展第20-23页
   ·脉冲场凝胶电泳分析(PFGE)第20-21页
   ·随机扩增多态性DNA分析(RAPD)第21页
   ·限制性片断长度多态性分析(RFLP)第21-22页
   ·核糖体分型(Ribotyping)第22页
   ·编码极性鞭毛的基因位点RFLP分析(Fla locus RFLP分析)第22页
   ·ERIC-PCR分型技术第22-23页
  2 基因检测方法的研究进展第23-25页
   ·基因探针第23页
     ·耐热溶血素基因(tdh)探针第23页
     ·不耐热溶血素基因(tlh)探针第23页
   ·常规PCR方法第23-24页
   ·多重PCR方法第24-25页
   ·荧光定量PCR技术第25页
  3 结语第25-26页
 第三章 创伤弧菌感染的研究进展第26-31页
  1 创伤弧菌感染症的流行病学第26-27页
   ·病原学第26页
   ·地区及季节分布第26页
   ·感染源与感染途径第26-27页
   ·人群分布及易感性第27页
  2 创伤弧菌感染症的临床特点第27页
  3 创伤弧菌的致病机制研究第27-31页
   ·细胞外酶第28页
   ·溶细胞素第28-29页
   ·其他第29-31页
     ·载铁体第29页
     ·弹性硬蛋白酶第29页
     ·巨噬细胞凋亡第29-31页
第二篇 实验研究第31-52页
 第四章 用基于TaqMan探针的Real-time PCR技术定量检测副溶血弧菌第31-39页
  1 材料和方法第31-33页
   ·材料第31-32页
     ·菌株第31-32页
     ·培养基第32页
     ·仪器第32页
   ·引物和TaqMan探针的设计和合成第32-33页
   ·细菌记数方法和分离鉴定第33页
   ·Real-time PCR第33页
     ·模板DNA的提取第33页
     ·PCR扩增第33页
   ·制作标准曲线第33页
  2 结果第33-37页
   ·Real-time PCR的特异性第33-34页
   ·Real-time PCR的敏感性第34-37页
     ·纯培养的副溶血弧菌DNA检测第34-35页
     ·人工布菌的牡蛎匀浆中副溶血弧菌DNA的检测第35-37页
  3 讨论第37-38页
  4 结论第38-39页
 第五章 用双重Real-time PCR方法同步定量检测副溶血弧菌及创伤弧菌第39-48页
  1 材料和方法第39-42页
   ·菌株第39页
   ·培养基第39-40页
   ·主要试剂和仪器第40页
   ·引物和TaqMan探针的设计和合成第40-41页
   ·细菌记数方法和分离鉴定第41页
   1 .6 Real-time PCR第41页
     ·样品的准备及DNA的提取第41页
     ·PCR扩增第41页
   ·制作标准曲线第41-42页
   ·干扰实验第42页
   ·人工布菌样品中副溶血弧菌和创伤弧菌的定量检测第42页
  2 结果第42-45页
   ·Real-time PCR的特异性和敏感性第42-44页
   ·干扰实验第44页
   ·人工布菌样品溶血弧菌和创伤弧菌DNA的检测第44-45页
  3 讨论第45-48页
 第六章 华东地区海产品中副溶血弧菌和创伤弧菌的污染情况调查第48-52页
  1 材料和方法第48-49页
   ·样品采集第48页
   ·培养基第48页
   ·主要试剂和仪器第48页
   ·细菌的分离鉴定第48-49页
   ·Real-time PCR第49页
     ·样品的准备及DNA的提取第49页
     ·PCR扩增第49页
  2 结果第49-50页
  3 讨论第50-52页
参考文献第52-58页
全文结论第58-59页
攻读硕士期间发表和完成的学术论文第59-60页
致谢第60页

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