| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| ·纤维素酶的概述 | 第14-17页 |
| ·纤维素酶的分类及来源 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的结构特征 | 第15页 |
| ·纤维素酶的作用机理 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第16-17页 |
| ·纤维素外切葡聚糖酶的研究现状 | 第17-20页 |
| ·纤维素外切葡聚糖酶的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·外切葡聚糖酶的分子生物学研究进展 | 第18-19页 |
| ·pGAP 启动子 | 第19-20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的研究现状 | 第20-24页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分类及来源 | 第20页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第20-21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的结构与催化反应机制 | 第21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分子生物学研究进展 | 第21-22页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第22-24页 |
| ·银杏叶的研究 | 第24-27页 |
| ·银杏黄酮化合物 | 第24-25页 |
| ·其它成分及药理功能 | 第25页 |
| ·银杏叶的应用 | 第25-27页 |
| 第二章 黑曲霉外切葡聚糖酶基因 cbh1 的克隆 | 第27-41页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌株及质粒（见表 2-1） | 第27页 |
| ·药品与酶 | 第27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·培养基与主要试剂配制 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·斜面培养 | 第29页 |
| ·种子摇瓶培养 | 第29-30页 |
| ·黑曲霉基因组 DNA 的提取 | 第30页 |
| ·克隆引物设计 | 第30页 |
| ·外切葡聚糖酶 cbh1 基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶核酸电泳 | 第31页 |
| ·目的片段的回收 | 第31-32页 |
| ·DNA 浓缩 | 第32页 |
| ·PCR 产物的 TA 克隆 | 第32页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌 | 第32-33页 |
| ·质粒小量提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的 PCR 验证 | 第34页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第34页 |
| ·外切葡聚糖酶 cbh1 基因内含子的去除 | 第34-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·黑曲霉基因组 DNA 提取 | 第36页 |
| ·外切葡聚糖酶基因 cbh1 的 PCR 扩增及重组质粒的筛选 | 第36-37页 |
| ·cbh1 基因内含子的分析及去除 | 第37-38页 |
| ·cbh1 基因序列分析 | 第38-40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 黑曲霉外切葡聚糖酶 cbh1 基因在毕赤酵母中的表达 | 第41-55页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·菌株及质粒（表 3-1） | 第41页 |
| ·药品与酶 | 第41页 |
| ·仪器设备 | 第41-42页 |
| ·培养基与主要试剂配制 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第43页 |
| ·PCR 扩增产物的割胶回收 | 第43页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第43页 |
| ·表达载体 pPICZαA 的双酶切 | 第43-44页 |
| ·目的片段浓缩 | 第44页 |
| ·重组质粒的构建 | 第44页 |
| ·感受态细胞 TOP10F’的制备与转化 | 第44页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第44页 |
| ·重组质粒的大量提取 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第45页 |
| ·毕赤酵母超级感受态的制备及转化 | 第45-46页 |
| ·酵母重组子的筛选 | 第46页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第46页 |
| ·重组外切葡聚糖酶活力的测定 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第48页 |
| ·重组外切葡聚糖酶酶学性质的研究 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-53页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第49页 |
| ·真核重组表达载体的构建及筛选 | 第49-50页 |
| ·表达载体的线性化及转化毕赤酵母 | 第50页 |
| ·重组菌株的阳性筛选 | 第50-51页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第51页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第51-52页 |
| ·重组外切葡聚糖酶酶学性质的研究 | 第52-53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第四章 密码子的优化及以 GAP 为启动子在毕赤酵母中表达 cbh1 的研究 | 第55-66页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·菌株及质粒（表 4-1） | 第55页 |
| ·酶与药品 | 第55-56页 |
| ·实验仪器 | 第56页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·外切葡聚糖酶基因 cbh1 的分析及改造 | 第56-57页 |
| ·引物设计与突变方案 | 第57页 |
| ·毕赤酵母的转化与筛选 | 第57-58页 |
| ·外切葡聚糖酶活性的检测 | 第58页 |
| ·重组酵母的 PCR 鉴定 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE 检测重组蛋白的表达 | 第59页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第59页 |
| ·重组酵母的转化与筛选 | 第59页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第59-61页 |
| ·重组酵母的 PCR 鉴定 | 第61页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测重组蛋白的表达 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-65页 |
| ·外切葡聚糖酶 cbh1 基因密码子优化 | 第61-62页 |
| ·重组酵母的获得及筛选 | 第62页 |
| ·基因优化前后重组酵母的活性平板显色比较 | 第62页 |
| ·基因优化前后重组酵母的产酶比较 | 第62页 |
| ·重组酵母的 PCR 鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组酵母的表达及 SDS-PAGE 分析 | 第63页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组酵母的获得及筛选 | 第64页 |
| ·重组酵母的 PCR 鉴定 | 第64页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第五章 黑曲霉β-葡萄糖苷酶的全基因优化表达及在改善银杏茶风味中的应用 | 第66-85页 |
| ·实验材料 | 第66-67页 |
| ·菌株及质粒（表 5-1） | 第66-67页 |
| ·药品、酶与试剂 | 第67页 |
| ·仪器设备 | 第67页 |
| ·培养基与主要试剂配制 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67-72页 |
| ·黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因 bgl1 的分析及改造 | 第67-68页 |
| ·优化后 bgl1 基因真核表达载体的构建 | 第68页 |
| ·重组质粒转化毕赤酵母及重组菌的株诱导表达 | 第68页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶酶活力的测定 | 第68-69页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第69页 |
| ·高拷贝转化子的获得 | 第69页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的制备 | 第69页 |
| ·银杏茶叶中黄酮化合物的提取与检测 | 第69-70页 |
| ·银杏茶叶中挥发油类物质提取 | 第70页 |
| ·β-葡萄糖苷酶对银杏茶叶黄酮化合物的酶解 | 第70-71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶对挥发油类物质的酶解 | 第71-72页 |
| ·结果与分析 | 第72-83页 |
| ·黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因 bgl1 的优化 | 第72-77页 |
| ·重组质粒的构建及重组酵母的筛选和诱导表达 | 第77-78页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE | 第78页 |
| ·高拷贝子重组酵母的筛选及诱导表达 | 第78-79页 |
| ·银杏茶叶中黄酮化合物的提取 | 第79页 |
| ·银杏茶叶中挥发油类物质提取 | 第79页 |
| ·HPLC 分析β-葡萄糖苷酶对黄酮化合物的酶解 | 第79-82页 |
| ·GC-MS 分析β-葡萄糖苷酶对挥发油类物质的酶解 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 第六章 β-葡萄糖苷酶耐高糖特性的定向改造 | 第85-103页 |
| ·实验材料 | 第85-86页 |
| ·菌株及质粒（表 6-1） | 第85页 |
| ·药品与酶 | 第85-86页 |
| ·仪器设备 | 第86页 |
| ·培养基与主要试剂配制 | 第86页 |
| ·实验方案一 | 第86-88页 |
| ·引物设计 | 第86页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第86-87页 |
| ·目的基因与 pGAPZαA 载体的双酶切 | 第87页 |
| ·重组载体的构建 | 第87页 |
| ·转化毕赤酵母及筛选转化子 | 第87页 |
| ·重组酵母的发酵 | 第87页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第87页 |
| ·葡萄糖对酶的抑制常数 Ki 的测定 | 第87页 |
| ·重组酵母的补料发酵 | 第87-88页 |
| ·实验方案二 | 第88-90页 |
| ·序列比对 | 第88页 |
| ·定点突变 | 第88-89页 |
| ·转化毕赤酵母及转化子的筛选 | 第89页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第89页 |
| ·耐葡萄糖 Ki 系数的测定 | 第89-90页 |
| ·实验方案三 | 第90-92页 |
| ·耐高糖菌株的驯化 | 第90页 |
| ·黑曲霉基因组 DNA 的提取 | 第90页 |
| ·引物设计 | 第90-91页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因 bgl1 的克隆 | 第91页 |
| ·驯化前后黑曲霉 bgl1 基因序列的比对 | 第91页 |
| ·定点突变 | 第91-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-102页 |
| ·利用 GAP 启动子在毕赤酵母中异源表达 bgl1 基因 | 第92-95页 |
| ·β-葡萄糖苷酶耐糖特性相关位点的基因突变 | 第95-98页 |
| ·耐高糖黑曲霉菌株驯化培养及基因分析 | 第98-102页 |
| ·讨论与小结 | 第102-103页 |
| 第七章 结果与讨论 | 第103-106页 |
| ·结论 | 第103-104页 |
| ·展望 | 第104-106页 |
| ·外切葡聚糖酶基因的进一步高效表达 | 第104-105页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因优化及应用于银杏茶的风味改善 | 第105页 |
| ·β-葡萄糖苷酶耐糖分子改造的研究 | 第105-106页 |
| 参考文献 | 第106-113页 |
