未培养微生物来源的纤维素酶功能基因的筛选
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| ·纤维素酶 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶研究及实际应用中存在的问题 | 第16-17页 |
| ·未培养微生物的研究 | 第17-21页 |
| ·环境基因组的构建 | 第17-18页 |
| ·从环境样品中提取并纯化微生物群体基因组 | 第18-19页 |
| ·环境基因组文库的构建 | 第19-20页 |
| ·环境基因组学的相关分析方法及策略 | 第20-21页 |
| ·本研究目的 | 第21-22页 |
| 第二章 环境样品中微生物的总DNA提取纯化 | 第22-31页 |
| ·实验材料、方法 | 第22-25页 |
| ·样品 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·环境样品总DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·环境样品总DNA的纯化 | 第24-25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-29页 |
| ·环境样品总DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·环境样品总DNA的纯化 | 第26-29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第三章 环境基因组文库的构建及分析 | 第31-38页 |
| ·材料方法 | 第31-34页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-34页 |
| ·Sau3A Ⅰ酶切条件的优化 | 第32页 |
| ·回收2-10Kb范围内的DNA片段 | 第32页 |
| ·牛瘤胃液基因组文库的构建 | 第32-33页 |
| ·构建的基因组文库的评价及文库容量 | 第33-34页 |
| ·基因组文库的扩增 | 第34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-37页 |
| ·Sau3A Ⅰ酶切条件的优化 | 第34-35页 |
| ·2-10 Kb DNA片段的回收 | 第35-36页 |
| ·基因组文库的构建及质量评价 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 基因组文库的活性筛选 | 第38-48页 |
| ·材料方法 | 第38-43页 |
| ·菌种 | 第38-39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·内切纤维素酶活性的筛选 | 第39页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活性的筛选 | 第39-40页 |
| ·活性克隆的鉴定 | 第40页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活的测定 | 第40-41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活力的测定 | 第41-43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·基因组文库的筛选 | 第43-45页 |
| ·内切葡聚糖酶活性克隆的筛选 | 第43-44页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| ·活性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| ·活性克隆诱导粗酶液酶活的测定 | 第45页 |
| ·活性克隆诱导粗酶液的平板验证 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第五章 纤维素酶基因的测序及序列分析 | 第48-73页 |
| ·序列测定及分析 | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-71页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的克隆和序列分析 | 第48-55页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Umcel3s1序列分析 | 第48-51页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因Umcel3c1序列分析 | 第51-55页 |
| ·内切纤维素酶基因的序列分析 | 第55-70页 |
| ·内切纤维素酶基因Umcel5s1的分析 | 第55-58页 |
| ·内切纤维素酶基因Umcel5c1的序列分析 | 第58-61页 |
| ·内切纤维素酶基因Umcel5c2的序列分析 | 第61-63页 |
| ·内切纤维素酶基因Umcel9e1的序列分析 | 第63-66页 |
| ·内切纤维素酶基因Umcel5e2的序列分析 | 第66-70页 |
| ·筛选到的未培养微生物纤维素酶的遗传进化树分析 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 第六章 筛选获得的纤维素酶酶学性质的初步分析 | 第73-85页 |
| ·材料和方法 | 第73-75页 |
| ·菌株 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73页 |
| ·仪器 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳 | 第73-74页 |
| ·活性染色 | 第74页 |
| ·活性克隆的初步酶学特性分析 | 第74-75页 |
| ·酶的最适pH值的测定 | 第74页 |
| ·酶的最适反应温度的测定 | 第74页 |
| ·酶pH耐受性测定 | 第74-75页 |
| ·酶热稳定性测定 | 第75页 |
| ·结果和讨论 | 第75-83页 |
| ·活性克隆的粗酶液的活性分析 | 第75-77页 |
| ·β-葡萄糖苷酶Umcel3c1酶学特性初步分析 | 第77-80页 |
| ·pH值对Umcel3c1酶活力的影响 | 第77-78页 |
| ·反应温度对Umcel3c1酶活力的影响 | 第78页 |
| ·pH值对Umcel3c1的稳定性影响 | 第78-79页 |
| ·温度对Umcel3c1稳定性的影响 | 第79-80页 |
| ·内切纤维素酶Umcel5s1酶学性质的初步研究 | 第80-83页 |
| ·反应温度对Umcel5s1酶活力的影响 | 第80-81页 |
| ·pH值对Umcel5s1酶活力的影响 | 第81-82页 |
| ·温度对Umcel5s1酶活力稳定性的影响 | 第82-83页 |
| ·pH值对Umcel5s1的稳定性影响 | 第83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 工作总结和展望 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 在读期间发表的论文 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
